Analysis of mechanisms for atopic dermatitis-like phenotype resulting from SREBF1 gene mutations

SREBF1基因突变导致特应性皮炎样表型的机制分析

• 批准号: 22K08432
• 负责人: 下村 尚子
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08432/
• 关键词: SREBF1; SREBP-1; アトピー性皮膚炎; 連珠毛; Atopic dermatitis; IFAP syndrome; monilethrix; lipid

令和4年度は、事前に作製してあったSREBP-1の野生型および2種類の変異型（p.R527Hおよびp.R527C）の発現ベクター（N末端にFlag-tagを導入）を培養細胞（HEK293T）にトランスフェクションし、細胞溶解液を回収後に抗Flag抗体を用いてwestern blot（WB）法を実施した。しかしながら、予想されるほどの発現量を認めなかった。そこで、tagの数を増やし、さらに開始コドンの上流にKozak配列を導入した新たな発現ベクターを作製し、同様の過剰発現系でWB法を行った結果、野生型・変異型ともに十分な発現量を確認できた。その後、脂質の成分を除去したウシ胎児血清を用いてHEK293T細胞を培養した条件でベクターをトランスフェクションし、過去の論文に記載された手法に従ってステロール非存在下でのSREBP-1の発現をWB法で解析したが、野生型と変異型のいずれにおいてもSREBP-1のN末端の切断および細胞核内への移行を確認することができなかった。現在、予想通りの結果が得られなかった理由を慎重に検討し、さまざまな条件下での追加実験を計画している。また、令和4年度中に患者の頭髪を電子顕微鏡で詳細に観察したところ、頭髪径が周期的に異常に細くなる連珠毛を呈していることが確認できた。さらに、抜去した成長期毛包からtotal RNAを抽出し、逆転写反応でfirst-strand cDNAを作製後にリアルタイムPCR法で毛髪に発現する複数の遺伝子の発現量を健常人と比較した結果、患者では明らかに毛ケラチン遺伝子の発現量が低下していることが明らかになった。

Ling and 4 years ago, the anti-Flag antibodies were detected by the method of western blot western blot (WB) after the treatment of SREBP-1, wild type, SREBP-1, wild type, wild type, virus (p.R527H), wild type, wild type, type 2, type 2 I don't know. I don't want to know. For example, the number of users, the number of tag, the number of users, the number of After the treatment, the fat and fat components were removed. The fetal serum was removed by HEK293T cell culture. The conditions were analyzed by WB method. The wild type, the wild type. the N-terminal of the SREBP-1. Now, if you want to understand the results, you can find the reason to be careful and to add to the plan under the condition that you are careful. In the middle of the year, the microphone of the patients and the patients in the middle of the year showed that the beads in the cycle of the hospital and the hospital in the middle of the year and the middle of the year showed that the beads were not in the cycle. Long-term hair packet extraction, total RNA extraction, reverse writing, reverse first-strand cDNA, PCR method, complex data, normal person, normal person, patient, patient and patient.