関節リウマチにおけるTph細胞に対する制御性T細胞の機能解析と治療への応用

アッセイ系の樹立；末梢血液および滑液から表面マーカーに対する抗体を用いて濾胞性ヘルパーT細胞細胞（Tph; CD4+PD-1hiCXCR5-）, 抑制性T細胞（Treg; CXCR5－CD25highCD127lowCD4+CD14-）,濾胞性抑制性T細胞 (Tfr; CXCR5+CD25highCD127lowCD4+CD14-), メモリーB細胞（memory B; CD19+CD27+IgD-CD38lowCD14-)をflowcytometryで細胞単離した。Tph細胞に対する抑制アッセイとして、CD3/CD28刺激あるいは無刺激のTreg/Tfr細胞とCD3/CD28刺激したTph細胞を共培養し、Tph細胞の細胞増殖、CXCL13およびIL-21の産生をflowcytometryで解析した。さらにmemory B細胞に対する抑制アッセイとして、CD3/CD28刺激あるいは無刺激のTreg/Tfr細胞とCD3/CD28刺激したTph細胞とmemory B細胞をsuperantigenであるStaphylococcal enterotoxin B (SEB)存在下に共培養した。Memory B細胞の増殖をflowcytometryで、IgG、IgMの産生をELISA法で測定した。末梢血液でも滑液でもCD3/CD28刺激したTreg細胞、Tfr細胞はTph細胞に対する細胞増殖抑効果、サイトカイン・ケモカイン産生抑制効果を示した。さらにCD3/CD28刺激したTreg細胞、Tfr細胞はTph細胞存在下のmemory B細胞に対する細胞増殖、抗体産生抑制効果を示した。これらの系を用いて関節リウマチにおけるTregおよびTfrの抑制能の評価ができると考えられた。

アッセイ系の樹立；末梢血液および滑液から表面マーカーに対する抗体を用いて濾胞性ヘルパーT細胞細胞（Tph; CD4+PD-1hiCXCR5-）, 抑制性T細胞（Treg; CXCR5－CD25highCD127lowCD4+CD14-）,濾胞性抑制性T細胞 (Tfr; CXCR5+CD25highCD127lowCD4+CD14-), メモリーB細胞（memory B; CD19+CD27+IgD-CD38lowCD14-)をflowcytometryで細胞単離した。Tph細胞に対する抑制アッセイとして、CD3/CD28刺激あるいは無刺激のTreg/Tfr細胞とCD3/CD28刺激したTph細胞を共培養し、Tph細胞の細胞増殖、CXCL13およびIL-21の産生をflowcytometryで解析した。さらにmemory B細胞に対する抑制アッセイとして、CD3/CD28刺激あるいは無刺激のTreg/Tfr細胞とCD3/CD28刺激したTph細胞とmemory B細胞をsuperantigenであるStaphylococcal enterotoxin B (SEB)存在下に共培養した。Memory B細胞の増殖をflowcytometryで、IgG、IgMの産生をELISA法で測定した。末梢血液でも滑液でもCD3/CD28刺激したTreg細胞、Tfr細胞はTph細胞に対する細胞増殖抑効果、サイトカイン・ケモカイン産生抑制効果を示した。さらにCD3/CD28刺激したTreg細胞、Tfr細胞はTph細胞存在下のmemory B細胞に対する細胞増殖、抗体産生抑制効果を示した。これらの系を用いて関節リウマチにおけるTregおよびTfrの抑制能の評価ができると考えられた。