電位依存性Ca2+チャネルα2δサブユニットを介したGLP-1分泌制御機構の解明

阐明电压门控 Ca2+ 通道 α2δ 亚基介导的 GLP-1 分泌控制机制

• 批准号: 22K08652
• 负责人: 山根 俊介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08652/
• 关键词: インクレチン分泌; GLP-1; CACNA2D1

腸管内分泌細胞株であるSTC-1細胞およびNCI-H716細胞を用いて、CACNA2D1サブユニットのGLP-1分泌における重要性を検討した。GLP-1産生細胞におけるCACNA2D1の発現を確認するため、GFPでGLP-1産生細胞が標識されたGcg-GFPノックインマウス腸管の免疫組織染色を行ったところ、GFP陽性細胞（GLP-1産生細胞）の約50%でCACNA2D1染色陽性を認めた。また腸管内分泌細胞株STC-1(マウス由来), NCI-H716(ヒト由来) のいずれにおいても、PCRおよび免疫染色でCACNA2D1の発現を確認した。GLP-1分泌におけるCACNA2D1の関与をSTC-1を用いて検討した。長鎖脂肪酸であるαリノレン酸 (ALA) 刺激によるSTC-1からのGLP-1分泌は、CACNA2D1の特異的阻害剤であるガバペンチン存在下で容量依存性に抑制された。またALA刺激によるSTC-1細胞内カルシウム濃度上昇は、ガバペンチン存在下で容量依存性に抑制された。生体でのGLP-1分泌におけるCACNA2D1の関与を評価するため、野生型マウスに対して、ガバペンチンの経口投与実験を行った。コーンオイル経口摂取時GLP-1分泌はガバペンチンの単回投与によって、抑制される傾向はあるものの有意差を認めなかった。また経口グルコース摂取時のGLP-1分泌はガバペンチンの単回投与によって影響を受けなかった。ガバペンチンの7日間連日投与後のコーンオイル経口摂取およびグルコース経口摂取後GLP-1分泌はvehicle投与群と差を認めなかった。ガバペンチンのbioavailabilityから、腸管内分泌細胞におけるCACNA2D1が阻害できていない可能性も考え、当初の予定どおり、腸管特異的CACNA2D1欠損マウスの作出に着手した。

Intestinal endocrine cell line STC-1 cells, NCI-H716 cells, secretion of CACNA2D1 GLP-1 cells, and importance of secretion. Confirmation of GLP-1-producing cells CACNA2D1, identification of GFP-GLP-1-producing cells Gcg-GFP no. According to the immunohistological staining of the intestinal tract, approximately 50% of the GFP-positive cells (GLP-1-producing cells) were stained positive for CACNA2D1. Intestinal endocrine cell line STC-1 (origin of Malus), NCI-H716 (origin of Malus), PCR immunostaining, and CACNA2D1 confirmed. The relationship between GLP-1 secretion and CACNA2D1 is related to the use of STC-1. Long-locked fatty acid ALA It stimulates the secretion of GLP-1 by stimulating STC-1 and inhibits the secretion of GLP-1 in a volume-dependent manner in the presence of the specific inhibitor of CACNA2D1, であるガバペンチン. ALA stimulates an increase in the concentration of ALA in STC-1 cells, and inhibits ALA in a volume-dependent manner in the presence of ALA. The relationship between GLP-1 secretion and CACNA2D1 in vivoため, wild type マウスに対して, ガバペンチンの経口出 and 実験を行った. GLP-1 is secreted during コーンオイル経口あはガバペンチンの単 return It is different from the one that suppresses the tendency of the one that has the same meaning and the one that suppresses the one's tendency. The secretion of GLP-1 when the また経口グルコース摂takes the はガバペンチンの単return and is affected by the けなかった.のコーンオイル経口摂取およびグルコーThe secretion of GLP-1 is detected in the vehicle after being taken out and administered to the group.ガバペンチンのbioavailabilityから、Intestinal endocrine cell damageにCACNA2D1 The possibility of the disease has been tested, and the original decision has been made, and the intestinal-specific CACNA2D1 deficiency has been made and started.