Development of an innovative molecular targeting therapy for GIST based on intracellular localization of mutated KIT

「研究の目的」本研究では，消化管間質細胞腫 (gastrointestinal stromal tumor: GIST) の主原因の変異KITチロシンキナーゼのゴルジ停留とそこからの増殖シグナル発信の要因としてin vitroの実験で明らかにした Protein Kinase D2 (PKD2) を中心に，ゴルジ停留の詳細な分子機構, チロシンリン酸化の必要性, 更にはこれらを踏まえた治療薬開発の基盤的解明を目的としている。｛進捗概要」本年度は，複数のGIST細胞株 (イマチニブ感受性株: GIST-T1; イマチニブ耐性株: GIST-R9, GIST430/654, GIST48) を用い，PKDキナーゼ阻害剤(CRT0066101)の効果を調べた。PKD阻害剤は，いずれのGIST細胞株に対しても細胞形態の収縮, 増殖抑制効果を示し，細胞死の誘導が観察され，8時間以内にアポトーシスマーカーのレベルが亢進していることが確認された。PKD阻害剤処理で自己リン酸化（PKD2活性化の指標として用いた）は抑制された。PKD阻害剤処理で，イマチニブ感受性，耐性に関わらず，変異KITはゴルジ領域から離れリソソームに移行し，変異KITが分解されていることを示唆するデータを得ている。また，PKD2阻害でPKDのエフェクターであるPI4-Kinase IIIB (PI4KIIIB) の産生物質PI4Pのレベルが低下した。siRNAによるPI4KIIIBのノックダウンは，CRT0066101処理と形態学的にも生化学的結果も類似し，KIT変異GISTではPKD2-PI4KIIIBが活性化していることを示唆した。今後，PKR2-PI4KIIIB経路活性化におけるKIT活性化の意義の解析と，臨床検体, ノックインマウスでの実験を行う。

「研究の目的」本研究では，消化管間質細胞腫 (gastrointestinal stromal tumor: GIST) の主原因の変異KITチロシンキナーゼのゴルジ停留とそこからの増殖シグナル発信の要因としてin vitroの実験で明らかにした Protein Kinase D2 (PKD2) を中心に，ゴルジ停留の詳細な分子機構, チロシンリン酸化の必要性, 更にはこれらを踏まえた治療薬開発の基盤的解明を目的としている。｛進捗概要」本年度は，複数のGIST細胞株 (イマチニブ感受性株: GIST-T1; イマチニブ耐性株: GIST-R9, GIST430/654, GIST48) を用い，PKDキナーゼ阻害剤(CRT0066101)の効果を調べた。PKD阻害剤は，いずれのGIST細胞株に対しても細胞形態の収縮, 増殖抑制効果を示し，細胞死の誘導が観察され，8時間以内にアポトーシスマーカーのレベルが亢進していることが確認された。PKD阻害剤処理で自己リン酸化（PKD2活性化の指標として用いた）は抑制された。PKD阻害剤処理で，イマチニブ感受性，耐性に関わらず，変異KITはゴルジ領域から離れリソソームに移行し，変異KITが分解されていることを示唆するデータを得ている。また，PKD2阻害でPKDのエフェクターであるPI4-Kinase IIIB (PI4KIIIB) の産生物質PI4Pのレベルが低下した。siRNAによるPI4KIIIBのノックダウンは，CRT0066101処理と形態学的にも生化学的結果も類似し，KIT変異GISTではPKD2-PI4KIIIBが活性化していることを示唆した。今後，PKR2-PI4KIIIB経路活性化におけるKIT活性化の意義の解析と，臨床検体, ノックインマウスでの実験を行う。