NGSを用いたKRAS変異陽性肺癌の耐性獲得機序の解明と併用療法の開発

利用NGS阐明KRAS突变阳性肺癌的耐药获得机制并开发联合治疗

• 批准号: 22K08975
• 负责人: 宮田 義浩
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08975/
• 关键词: 肺癌; KRAS G12C変異; KRAS; Lung cancer; NGS

肺腺癌では特定のドライバー遺伝子変異・転座を標的とした分子標的薬は極めて有効だが、耐性獲得が大きな課題である。KRAS変異は肺腺癌のみならず扁平上皮癌においても高い陽性率が報告され、最近開発された新規分子標的薬の臨床応用が期待されているが、その耐性機序についての報告は未だ少ない。本研究ではKRAS変異陽性肺癌細胞をKRAS阻害剤と短期間培養し、1) KRAS自体の微量な耐性変異に絞って深く解析するNGS、2) 特定の遺伝子シグナルの増強を網羅的に解析するNGSを2通り使い分けて、耐性メカニズム解明を目指す。我々はまず当科で切除された腺癌（877例）、扁平上皮癌（113例）についてKRAS G12C変異の頻度をddPCRを用いて解析した。KRAS G12C変異頻度は腺癌で2.9% (25/877) 、 扁平上皮癌で1.8% (2/113)であり、その変異頻度は両組織型で有意差を認めず、扁平上皮癌においてもKRAS阻害剤も有効性が期待される結果であった。KRAS変異を有する肺腺癌と扁平上皮癌の複数の細胞株、腺癌 (H23, HOP62), 扁平上皮癌 (Calu-1)に、KRAS阻害剤（AMG-510, MRTX849, ARS-1620）を加え2週間培養した後に細胞を回収し、NGSで下流の遺伝子のシグナル発現増強について解析した。KRAS inhibior投与でmTORのmRNA発現増強を認め、Western Blottingを用いてその再現性を確認した。肺腺癌と扁平上皮癌の細胞株を用いてKRAS阻害剤とmTOR阻害剤 (Everolimus)を併用投与したところ、MTS assay と Colony forming assayで相乗的な細胞増殖抑制効果を肺腺癌と扁平上皮癌の両方で認めた。

Lung adenocarcinoma で は specific の ド ラ イ バ ー heritage 伝 sub - vision, planning a を mark と し た molecular mark 薬 は extremely め て have sharper だ が, patience to get が き な subject で あ る. KRAS - different は lung adenocarcinoma の み な ら ず squamous cell carcinoma に お い て も い high positive rate が report さ れ, recently 発 さ れ た new rules of molecular mark 薬 の clinical 応 が expect さ れ て い る が, そ の patience machine sequence に つ い て の report は not less だ な い. This study で は KRAS - different positive lung cancer cells を KRAS resistance against tonic と short period training し, 1) KRAS autologous の trace な patience - different に ground っ て deep く parsing す る NGS, 2) specific の but 伝 シ グ ナ ル の raised strong を snare に parsing す る NGS を 2 tong り make い points け て, patience メ カ ニ ズ ム interpret を refers す. I 々 は ま ず when で excision さ れ た adenocarcinoma (877 cases), squamous cell carcinoma (n = 113) に つ い て KRAS G12C - different の frequency を ddPCR を with い て parsing し た. KRAS G12C - different frequency は adenocarcinoma で で 1.8% 2.9% (25/877), squamous cell carcinoma (2/113) で あ り, そ の - different frequency は で deliberately struck organization and the difference between を recognize め ず, squamous cell carcinoma に お い て も KRAS resistance against tonic も have sharper sex が expect さ れ る results で あ っ た. KRAS variations を include する lung adenocarcinoma と squamous cell carcinoma <s:1> multiple <s:1> cell lines, adenocarcinoma (H23, HOP62), squamous cell carcinoma (Calu-1)に, KRAS inhibitors (AMG-510, MRTX849) ARS - 1620) を え between 2 weeks training し た に cells after を back 収 し, NGS で obscene の heritage 伝 son の シ グ ナ ル 発 now raised strong に つ い て parsing し た. KRAS inhibior administration to でmTOR <s:1> mRNA showed an increase in を recognition め, and Western Blottingを confirmed <s:1> た by <s:1> てそ <s:1> reproducibility を. Lung adenocarcinoma と の squamous cell carcinoma cell lines を with い て KRAS resistance against tonic と mTOR resistance against tonic () of Everolimus を and cast with し た と こ ろ, MTS assay と Colony forming assay で phase 乗 な cells raised colonization inhibition of unseen fruit を squamous epithelial carcinoma of the lung adenocarcinoma と の struck party で recognize め た.