NGSを用いたKRAS変異陽性肺癌の耐性獲得機序の解明と併用療法の開発

利用NGS阐明KRAS突变阳性肺癌的耐药获得机制并开发联合治疗

• 批准号: 22K08975
• 负责人: 宮田 義浩
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08975/
• 关键词: 肺癌; KRAS G12C変異; KRAS; Lung cancer; NGS

肺腺癌では特定のドライバー遺伝子変異・転座を標的とした分子標的薬は極めて有効だが、耐性獲得が大きな課題である。KRAS変異は肺腺癌のみならず扁平上皮癌においても高い陽性率が報告され、最近開発された新規分子標的薬の臨床応用が期待されているが、その耐性機序についての報告は未だ少ない。本研究ではKRAS変異陽性肺癌細胞をKRAS阻害剤と短期間培養し、1) KRAS自体の微量な耐性変異に絞って深く解析するNGS、2) 特定の遺伝子シグナルの増強を網羅的に解析するNGSを2通り使い分けて、耐性メカニズム解明を目指す。我々はまず当科で切除された腺癌（877例）、扁平上皮癌（113例）についてKRAS G12C変異の頻度をddPCRを用いて解析した。KRAS G12C変異頻度は腺癌で2.9% (25/877) 、 扁平上皮癌で1.8% (2/113)であり、その変異頻度は両組織型で有意差を認めず、扁平上皮癌においてもKRAS阻害剤も有効性が期待される結果であった。KRAS変異を有する肺腺癌と扁平上皮癌の複数の細胞株、腺癌 (H23, HOP62), 扁平上皮癌 (Calu-1)に、KRAS阻害剤（AMG-510, MRTX849, ARS-1620）を加え2週間培養した後に細胞を回収し、NGSで下流の遺伝子のシグナル発現増強について解析した。KRAS inhibior投与でmTORのmRNA発現増強を認め、Western Blottingを用いてその再現性を確認した。肺腺癌と扁平上皮癌の細胞株を用いてKRAS阻害剤とmTOR阻害剤 (Everolimus)を併用投与したところ、MTS assay と Colony forming assayで相乗的な細胞増殖抑制効果を肺腺癌と扁平上皮癌の両方で認めた。

在肺腺癌中，靶向特定驱动基因突变和易位的分子靶向药物非常有效，但是实现抗性是一个主要挑战。 KRAS突变报告不仅在肺腺癌中而且在鳞状细胞癌中也有很高的阳性速率，尽管预计新开发的新型新型分子靶向药物的临床应用预计仍然很少有关于其耐药性机制的报道。在这项研究中，我们旨在通过使用两种不同的方法来阐明抗性机制：KRAS突变阳性肺癌细胞，1）对KRAS本身中KRAS突变阳性突变的深入分析，以及2）NGS，可以全面分析特定基因信号的增强。我们首先分析了使用DDPCR在我们部门切除的腺癌（877例）和鳞状细胞癌（113例）中KRAS G12C突变的频率。腺癌中KRAS G12C突变的频率为2.9％（25/877），鳞状细胞癌的频率为1.8％（2/113），两种组织学类型之间的突变频率也没有显着差异，而KRAS抑制剂也没有显着差异。与KRAS突变，腺癌（H23，Hop62），鳞状细胞癌（CALU-1）的多个细胞系与KRAS抑制剂（AMG-510，MRTX849，MRTX849，ARS-5620）一起进行了2周和细胞，并分析了2周，并分析了2周，并分析了2周，并分析了2周，并添加了多个细胞系（H23，Hop62）（H23，Hop62），鳞状细胞癌（CALU-1），并添加了2周的细胞，并进行了2周，并分析了2周，并添加了2周，并分析了2周，并添加了2周，并添加了2周，并分析了2周使用ngs的下游基因。当施用KRAS抑制剂时，增强了MTOR的mRNA表达，并使用蛋白质印迹确认其可重复性。当KRAS抑制剂和MTOR抑制剂（EVelolimus）与肺腺癌和鳞状细胞癌细胞细胞系结合使用时，MTS分析和菌落形成分析显示出协同的细胞增殖抑制作用在两种肺腺癌和鳞状细胞癌和鳞状细胞癌中均具有协同的抑制作用。