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Detection of circulating tumor cells with a novel microfluidic system in patients with lung cancer

使用新型微流体系统检测肺癌患者的循环肿瘤细胞

基本信息

批准号：
22K08987
负责人：
田中文啓
金额：
$ 2.58万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

循環腫瘍細胞は原発巣から遊離した癌細胞が血管内へ浸潤し、血流に乗って遠隔転移を形成する原因そのものである。この循環腫瘍細胞の検出および分子生物学的特徴の解析は、癌の遠隔転移検出とその制御につながるため非常に重要である。これまでに我々は、高感度CTC検出系の開発に取り組み、マクロ流路システム(CTCchip)を完成させた。この新開発CTC-chipは、CellSearchを超える高感度CTC検出システムであり、更に捕捉したCTCの分子生物学的解析が可能であることを特徴としている。このシステムを使用し、肺癌や悪性胸膜中皮腫において高効率にCTCを検出することが可能となり、捕捉したCTCがPCRベースで遺伝子変異の検出が可能であることを確認している。我々は今回、このシステムを更に先に一歩進めるため、捕捉されたCTCを次世代シーケンサーを使用し、網羅的に変異解析が可能かどうかを検討した。本研究では、血液サンプルを使用し、血中に含まれるCTCを捕捉・変異解析可能な系を樹立するため、まずは細胞株を使用した基礎検討を行った。肺癌細胞株(PC9, H1975, H441)を使用し、CTC-chip上に捕捉された細胞を鏡視下にてマイクロマニュピレーターで単離した。その単離した細胞からDNAを抽出して、次世代シーケンサー(Ion PGM)にてtarget sequenceを試みた。本検討において、我々はCTC chip上での細胞の固定法を工夫した。如何にDNAにダメージを入れず、生細胞に近い状態で細胞が回収できるかを工夫することで、高精度にtarget sequenceできる方法を構築した。この方法により、検討に使用した肺癌細胞株(PC9, H1975, H441)の全てでsingle cellから50個の癌関連遺伝子を網羅的に変異解析することが可能であることを確認した。

The tumor cells were isolated from the cancer cells by intravascular immersion, blood flow, septal displacement, cause, and so on. It is very important to analyze the characteristics of molecular biology and to move the cancer out of the cell. Make sure that we do, and that the high-sensitivity CTC system starts the data acquisition system and the CTCchip system completes the test. New CTC-chip, CellSearch, high sensitivity CTC, and better capture of the molecular biology of CTC may cause significant changes in molecular biology. Use, lung cancer, pleural epithelioma, high incidence of lung cancer, CTC, PCR, capture, CTC, and confirm the possibility of infection. This time, we will try to get more information on how to use the next-generation CTC, and the possible impact on the resolution of the network. In this study, blood samples were used, blood samples were collected, CTC captures were analyzed, and cell lines were used. Lung cancer cell line (PC9, H1975, H441) was used and captured on CTC-chip. The next generation (Ion PGM), the target sequence cell, the target sequence cell, the next generation cell, and the next generation cell. In this paper, we use the method of fixing the cells on the CTC chip for a long time. How to DNA the data, how to use the current status of the cell, how to improve the accuracy of the method, and how to improve the accuracy of the method. Methods the whole cell line (PC9, H1975, H441) of lung cancer (PC9, H1975, H441) was used to analyze the data of 50 sub-networks linked to cancer.