脳死関連肺障害の病態解明と予防・治療法の開発ーNPY,VEGFと腸換気法の検討

我々は、神経原性肺水腫の発生において、肺交感神経終末にカテコールアミンと共存する神経ペプチドY（NPY）による神経性調節が細胞透過性に関与すること、および肺（気管支粘膜、平滑筋、肺胞毛細血管内皮細胞）における血管内皮細胞増殖因子（vascular endothelial growth factor: VEGF）の発現が肺血管透過性亢進に深く関与していることを明らかにしてきた。本研究の目的は、in vitro肺細胞透過性評価系とげっ歯類を用いたin vivo脳死誘発肺水腫モデル系を確立し、NPYやVEGFの作用機序を明らかにすることである。また、脳死患者の肺障害の予防・治療法の一つとして、「腸換気法」による肺保護効果についても検討する。本年度は、ラットから単離した肺胞上皮細胞を使用するin vitro肺細胞透過性評価系とin vivo脳死誘発肺水腫モデルの構築及び「腸換気法」の有用性の検討を試みた。In vitro肺細胞透過性評価系には、ラットから単離した2型肺胞上皮細胞を1型肺胞上皮細胞に分化した初代細胞を用いることにした。しかしながら、2型肺胞上皮細胞の選択的回収がうまくできなかった。そのため、単離後の細胞分化、使用する培地、最適な細胞播種密度、細胞培養期間などについても検討できなかった。In vivo脳死誘発肺水腫モデルは、ラット頭蓋内にバルーンカテーテルを挿入し、バルーン内に生理食塩水を注入することにより頭蓋内圧を上昇させ、脳幹部にヘルニアを起こすことにより作製した。同モデルからの気管支肺胞洗浄液（Bronchoalveolar lavage fluid: BALF）採取法を確立し、サンプル中の総蛋白を含む生化学的検査法を検討中である。

我々は、神経原性肺水腫の発生において、肺交感神経終末にカテコールアミンと共存する神経ペプチドY（NPY）による神経性調節が細胞透過性に関与すること、および肺（気管支粘膜、平滑筋、肺胞毛細血管内皮細胞）における血管内皮細胞増殖因子（vascular endothelial growth factor: VEGF）の発現が肺血管透過性亢進に深く関与していることを明らかにしてきた。本研究の目的は、in vitro肺細胞透過性評価系とげっ歯類を用いたin vivo脳死誘発肺水腫モデル系を確立し、NPYやVEGFの作用機序を明らかにすることである。また、脳死患者の肺障害の予防・治療法の一つとして、「腸換気法」による肺保護効果についても検討する。本年度は、ラットから単離した肺胞上皮細胞を使用するin vitro肺細胞透過性評価系とin vivo脳死誘発肺水腫モデルの構築及び「腸換気法」の有用性の検討を試みた。In vitro肺細胞透過性評価系には、ラットから単離した2型肺胞上皮細胞を1型肺胞上皮細胞に分化した初代細胞を用いることにした。しかしながら、2型肺胞上皮細胞の選択的回収がうまくできなかった。そのため、単離後の細胞分化、使用する培地、最適な細胞播種密度、細胞培養期間などについても検討できなかった。In vivo脳死誘発肺水腫モデルは、ラット頭蓋内にバルーンカテーテルを挿入し、バルーン内に生理食塩水を注入することにより頭蓋内圧を上昇させ、脳幹部にヘルニアを起こすことにより作製した。同モデルからの気管支肺胞洗浄液（Bronchoalveolar lavage fluid: BALF）採取法を確立し、サンプル中の総蛋白を含む生化学的検査法を検討中である。