悪性脳腫瘍に対するヒト脱落乳歯歯髄幹細胞を用いた新規腫瘍溶解ウイルス療法

使用人乳牙牙髓干细胞治疗恶性脑肿瘤的新型溶瘤病毒疗法

• 批准号: 22K09204
• 负责人: 小泉 慎一郎
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09204/
• 关键词: ヒト脱落乳歯歯髄幹細胞; 腫瘍溶解ウイルス; グリオーマ幹細胞; 腫瘍溶解ウイルス療法; 悪性脳腫瘍

[グリオーマ幹細胞の培養増殖]：Massachusetts General Hospitalの脇本先生とMTA契約を締結して入手してあったグリオーマ幹細胞のMGG4, MGG8, MGG18, MGG23をそれぞれ幹細胞培養で増殖し、安定した継代・増殖のセットアップを確立した。ストックを作成した4種類のグリオーマ幹細胞をそれぞれ1×105 cellsずつヌードマウス脳内に投与し (n = 4)、MGGモデルマウスの作成に成功した。4種類のMGGモデルマウスでそれぞれ生存曲線を作成した。[腫瘍溶解ウイルス (oncolytic virus: OV)のセットアップ]：大臣確認実験の申請通過後、新規OVのHSV-P10およびRAMBOをそれぞれアフリカミドリザル腎臓由来のVero細胞に感染させ、ウイルスの複製・増殖を行った。複製したOVはスクロース遠心で精製し、他の実験に使用できるようにストックを作成した。[OVの抗腫瘍効果の検証]：精製したOVを段階的に感染多重度 (multiplicity of infection: MOI)を設定し、グリオーマ細胞株であるＵ-251およびLuciferase遺伝子を導入してあるU-87 MG-Luc2に感染させ、cell viability assayを行ってOVの抗腫瘍効果を確認した。[ヒト脱落乳歯歯髄幹細胞 (stem cells from human exfoliated deciduous teeth: SHED)への感染実験]：精製したOVを段階的にMOIを設定してSHEDに感染させ、GFPの蛍光顕微鏡観察でSHED内でもOVが増殖しうることを確認した。また、OVを感染させたSHEDのcell viability assayを行い、SHEDに感染させる際のMOIの至適値を検証した。[腫瘍細胞とSHED-OVの共培養]：OVを感染させたSHED (SHED-OVとする)をグリオーマ腫瘍細胞株であるU-251およびU-87 MG-Luc2と共培養し、いずれの細胞でもOV単体の感染より優れた抗腫瘍効果を持つことが示唆された。

MG4, MG8, MGG23 stem cell culture was established. 4 types of stem cells were successfully prepared, including 1×105 cells and MGG cells. 4 kinds of MGG [Oncolytic virus: OV]: After the Minister confirmed the approval of the application, the new HSV-P10 and RAMBO regulations were approved. The Vero cells from which the virus originated were infected, replicated and propagated. OV is a remote control system, and it can be used to create [OV Detection of anti-tumor effect: Refined OV stage multiplicity of infection (MOI) setting, cell line U-251 and Luciferase gene introduction, cell viability assay and confirmation of anti-tumor effect. [Infection status of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED)]: MOI settings for purification to OV levels for SHED infection, GFP for optical microscopy, and confirmation of OV proliferation in SHED. The MOI at the time of infection was evaluated. [Tumor Cell and SHED-OV Co-culture]: OV infection, SHED (SHED-OV), U-251 and U-87MG-Luc 2 co-culture, OV infection, anti-tumor effect, anti-tumor effect.