权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

難治性口腔がんに有効な腫瘍溶解ウイルスの開発

开发有效对抗难治性口腔癌的溶瘤病毒

基本信息

批准号：
21K10130
负责人：
安田元昭
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

令和４年度は主に2つの実験を行い以下の結果を得ることができた。①アデノウイルス初期プロモーター（E1,E2,E3,E4)さらに主要後期プロモーターLuciferase上流にクローニングしたレポーター遺伝子を作成し、種々の細胞内での発現を確認した。HeLa細胞を用いて、山中４因子（Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc）の強制発現によるアデノウイルス初期遺伝子プロモーターの発現変化をLuciferase assay により検討した。この実験では、山中４因子のうちOct3/4, Sox2がE1プロモーターを有意に抑制した。Lin28AおよびNanogの強制発現はE1プロモーター活性化に影響をおよぼさなかった。また内在性Tp53が欠損しているH1299肺がん細胞を用いた実験においてはTp53とKlf4が相互作用し互いの転写因子としての作用を抑制しあうことが確認された。これまでOct3/4とSox2の共発現ががん幹細胞性の形質誘導に重要であることが報告されており、このような細胞では少なくとも野生型のE1領域を有するヒトアデノウイルスの増殖が抑制される可能性が示唆された。②線虫およびヒトBNIP3の共通アミノ酸配列に対するポリクローナル抗体の作成に成功した。この抗体によりウイルス非増殖性の齧歯類動物の正常細胞における内在性のBNIP3とｐ62の共局在を検出できる可能性が高くなった。ヒト細胞系ではヒトアデノウイルスの増殖性が著しいため、細胞形態の異常が著しく、これまでごく初期の感染ステージでのみ画像解析が可能であったが、非増殖性細胞へのウイルス感染実験でBNIP3検出が可能になったことから, 感染後期における状況について、より詳細な解析が期待できると考えている。

The following results were obtained in the fourth year of the order: The early stages of Luciferase production (E1,E2,E3,E4) are mainly late stages. HeLa cells were examined in the context of the Luciferase assay in response to stress development by using the four factors (Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc). The 4 factors in the mountain are intentionally suppressed Oct3/4, Sox2 and E1. Lin28A and Nanog stress response to E1 activation Inherent Tp53 is deficient in H1299 lung cancer cells, and Tp53 and Klf4 interact with each other to inhibit the effects of these factors. The co-expression of Oct3/4 and Sox2 is important for the induction of stem cell properties. This report indicates that there is a possibility that the proliferation of stem cells may be inhibited by the presence of Oct3/4 and Sox 2 in the wild type E1 domain. 2. Successful preparation of anti-BNIP3 antibody for the common acid alignment of BNIP3. This antibody is highly likely to be detected in normal cells of non-reproductive rodents and in the presence of endogenous BNIP3 and p62. The proliferation of cell lines was observed, the morphological abnormalities of cells were observed, and the early stage of infection was observed. The profile analysis of non-reproductive cells was possible, and the infection was observed in BNIP3. The late stage of infection was observed, and detailed analysis was expected.