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Functional analysis of primary cilia in the prostate cancer microenvironment and diagnostic and therapeutic strategies

前列腺癌微环境中初级纤毛的功能分析及诊断和治疗策略

基本信息

批准号：
22K09499
负责人：
渡邉昌俊
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09499/
关键词：
前立腺癌細胞微小環境一時線毛共培養系癌微小環境一次線毛

项目摘要

本研究では、前立腺癌微小環境を模した共培養系で、前立腺癌細胞、脂肪細胞、および相互作用における一次線毛の発現・機能解析を行い、各細胞および腫瘍微小環境における一次線毛の重要性を明らかにし、前立腺癌の診断・治療への新たな可能性を探ることを目的とした。本年度は共培養系の構成要素である単体の細胞株での一次繊毛の発現パネルを作成することを目指した。パネルを構成する細胞は、前立腺癌細胞株DU145、PC-3、肺癌細胞株A549、子宮頸癌細胞株Hela及び脂肪細胞とした。文献的には、PC-3及びHela細胞株での発現が報告されている。特異的な抗体であるARL13B (ADP-ribosylation factor-like GTPase 13B)を用いる蛍光免疫染色で、一次線毛を検出することにした。評価系の確立のため、スライドチャンバーの使用、播種細胞数、培養時間などの条件設定を行った。細胞接着及び封入の問題が生ずるも、評価を行った。positive controlとしてのHela細胞の一次線毛を確認できたが、同様のPC-3細胞には発現が認められず、文献的には発現が報告されていないDU145細胞に一次線毛の発現を認めた。一次線毛膜上にはGタンパク質共役型受容体、増殖受容体やイオンチャンネルが存在し、ヘッジホッグ(Hedgehog: Hh)シグナルやWnt/β-カテニンシグナル伝達につながるシグナルハブであるということは、逆に細胞密度、細胞増殖期などに左右される可能性があり、同調培養など条件をより厳密に設定し、評価する必要があると考えられた。

In this study, the development and function analysis of primary hair in the microenvironment of prostate adenocarcinoma cells, adipocytes and their interaction in co-culture lines, and the importance of primary hair in the microenvironment of prostate adenocarcinoma cells and adipocytes were studied. This year, the primary hair development of the cell lines of the co-culture system was described. The cell line is composed of adenocarcinoma cell line DU145, PC-3, lung cancer cell line A549, cervical cancer cell line Hela and adipocyte. The development of Hela, PC-3 and Hela cell lines was reported in the literature. ARL-13B (ADP-ribosylation factor-like GTase-13B) is a specific antibody that can be detected by light immunostaining and primary hair detection. Evaluation of the establishment of the system, the use of seed cells, the number of cells seeded, the culture time, and the setting of conditions. Cell adhesion and encapsulation problems arise in the process of evaluation. The positive control was confirmed in Hela cells, the same was found in PC-3 cells, and the literature was reported in DU145 cells. The existence of a co-active receptor and a growing receptor on a primary capillary membrane, the existence of a (Hedgehog: Hh) system, and the possibility of cell density and cell growth period. The conditions for isochronous culture are set and evaluated.