Functional analysis of primary cilia in the prostate cancer microenvironment and diagnostic and therapeutic strategies

前列腺癌微环境中初级纤毛的功能分析及诊断和治疗策略

基本信息

批准号：
22K09499
负责人：
渡邉昌俊
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09499/
关键词：
前立腺癌細胞微小環境一時線毛共培養系癌微小環境一次線毛

项目摘要

本研究では、前立腺癌微小環境を模した共培養系で、前立腺癌細胞、脂肪細胞、および相互作用における一次線毛の発現・機能解析を行い、各細胞および腫瘍微小環境における一次線毛の重要性を明らかにし、前立腺癌の診断・治療への新たな可能性を探ることを目的とした。本年度は共培養系の構成要素である単体の細胞株での一次繊毛の発現パネルを作成することを目指した。パネルを構成する細胞は、前立腺癌細胞株DU145、PC-3、肺癌細胞株A549、子宮頸癌細胞株Hela及び脂肪細胞とした。文献的には、PC-3及びHela細胞株での発現が報告されている。特異的な抗体であるARL13B (ADP-ribosylation factor-like GTPase 13B)を用いる蛍光免疫染色で、一次線毛を検出することにした。評価系の確立のため、スライドチャンバーの使用、播種細胞数、培養時間などの条件設定を行った。細胞接着及び封入の問題が生ずるも、評価を行った。positive controlとしてのHela細胞の一次線毛を確認できたが、同様のPC-3細胞には発現が認められず、文献的には発現が報告されていないDU145細胞に一次線毛の発現を認めた。一次線毛膜上にはGタンパク質共役型受容体、増殖受容体やイオンチャンネルが存在し、ヘッジホッグ(Hedgehog: Hh)シグナルやWnt/β-カテニンシグナル伝達につながるシグナルハブであるということは、逆に細胞密度、細胞増殖期などに左右される可能性があり、同調培養など条件をより厳密に設定し、評価する必要があると考えられた。

这项研究旨在分析原发性纤毛在前列腺癌细胞，脂肪细胞和相互作用中的表达和功能，这些结合系统模仿了前列腺癌微环境，并阐明原发性纤毛在每种细胞和肿瘤微环境中的重要性，并探索对诊断和治疗的新可能性。今年，我们旨在在单个细胞系中创建一组主要纤毛的表达，这是共培养系统的组成部分。组成面板的细胞是前列腺癌细胞系DU145，PC-3，肺癌细胞系A549，宫颈癌细胞系HELA和脂肪细胞。文献报道已报告在PC-3和HeLa细胞系中的表达。使用特异性抗体ARL13B（ADP-核糖基化因子样GTPase 13B）确定原发性原纤维通过荧光免疫染色检测。为了建立评估系统，设置了诸如使用幻灯片室，种子细胞数量和培养时间之类的条件。还评估了细胞粘附和封装问题。尽管原发性菌毛被证实为阳性对照，但在相似的PC-3细胞中未观察到表达，并且在DU145细胞中观察到了原代菌毛的表达，这在文献中尚未报道。 G蛋白偶联受体，增殖受体和离子通道存在于主要纤毛膜上，并且是导致刺猬（HH）信号传导和Wnd/β-catenin信号传导的信号枢纽，另一方面，它可以依赖于细胞密度，细胞生长阶段等。