Establishment of an in vitro implantation model

体外植入模型的建立

• 批准号: 22K09562
• 负责人: 阿部 高也
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09562/
• 关键词: in vitro着床モデル; マウス初期胚; 着床前後; 胚培養; 子宮組織

有胎盤類において、着床はその後の胎盤形成に重要な発生過程の一つである。しかし、母体内で起きるこの現象は直接観察することが難しく、胚と子宮間の相互作用メカニズムは不明な点が多く残されている。この問題を解決するためマウスを用いて、1)着床前後の胚培養と2)擬似子宮組織の三次元培養法を確立する。これらを組み合わせることでin vitroにおいて着床を再現することを目指す。ここでの着床は胚が子宮上皮細胞に接着して、着床後に子宮組織で起きる脱落膜化までの現象とする。マウスにおいて着床前後の胚培養技術は、近年に飛躍的に改善された。しかし、ディッシュ上で培養するため、胚が扁平に発生することや発生効率を上げるため胚体外組織となる部分を取り除く処置を施すため、in vivoの現象を再現することは難しいと考える。特に、マウスでは上記の取り除かれた領域は子宮上皮と接着することが知られている。これらの問題を解決するため、採取した胚盤胞期胚を三次元培養ゲルで培養する方法を進めてきた。また、従来の方法のもう一つの問題点として、胚のみを培養しており、つまり子宮組織を用いていないため、着床前後の胚と子宮間の相互作用を再現することはできないことが挙げられる。そこで、子宮組織より細胞を単利して、培養ゲルを用いて三次元培養を進めており、上皮組織と間質細胞を層状に培養する方法を確立した(擬似子宮組織)。今後は、胚培養の発生効率の向上、および擬似子宮組織をin vivoの子宮が胚を受け入れられる状態(receptive window)へ誘導する方法を検討する。

在胎盘中，植入是随后胎盘形成的重要发育过程之一。但是，这种现象发生在母体内部是很难直接观察到的，并且许多未知数仍然存在于胚胎和子宫之间的相互作用机理。为了解决这个问题，使用小鼠在植入前后建立1）胚胎培养物，以及2）假紫外线组织的三维培养方法。通过结合这些，我们旨在在体外复制植入。这里的植入是一种现象，其中胚胎粘附在子宫上皮细胞上，并在植入后发生在子宫组织中，直到结化。近年来，植入小鼠之前和之后的胚胎培养技术已显着改善。但是，由于胚胎是在菜肴上种植的，因此它们经过治疗，以去除变成胚外组织以提高发育效率的部分，因此很难复制体内现象。特别是，众所周知，上述所描述的去除区域粘附在小鼠中的子宫上皮。为了解决这些问题，我们继续采用一种在三维培养凝胶上培养收集的胚泡阶段胚胎的方法。常规方法的另一个问题是，只有胚胎是培养的，即不使用子宫组织，因此不能再现植入前后的胚胎和子宫之间的相互作用。因此，细胞仅是从子宫组织中有益的，并使用培养凝胶进行了3D培养物，并且已经建立了层中上皮组织和基质细胞的方法（伪 - 餐质组织）。将来，我们将研究提高胚胎培养的发育效率并将伪 - 紫外线组织引导到体内状态的方法，该状态允许接受胚胎（接受窗口）。

项目成果

Establishment of Knock-in Mice and Rats with CRISPR/Cas9 system in zygotes

利用 CRISPR/Cas9 系统在受精卵中建立基因敲入小鼠和大鼠

• 发表时间: 2023
• 作者: 梁英敏;重村克巳;大西玲於 ;前田光毅;高島遼一;滝口哲也;藤澤正人;Takaya Abe
• 通讯作者: Takaya Abe