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卵巣がんにおける腫瘍浸潤T細胞の免疫不応状態の克服による複合的免疫療法の開発

通过克服卵巢癌肿瘤浸润 T 细胞的免疫难治性开发复合免疫疗法

基本信息

批准号：
22K09604
负责人：
西尾浩
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09604/
关键词：
卵巣がんがん免疫療法免疫寛容がん微小環境

项目摘要

1.anergyを規定するFR4/CD73発現解析FR4/CD73の発現を認める免疫細胞を同定するためにC57BL6健常マウスより末梢リンパ節・脾臓組織を摘出し，各細胞分画をFACS AriaIIによりsortingし，qPCRおよびwestern blot法にてNrn1の発現を解析した．結果：FR4/CD73はTreg(CD4+CD25+FoxP3+)で発現が他の細胞分画と比較し，最も上昇していた．すなわちFR4/CD73は免疫細胞の中でも特にTreg細胞およびanergic T細胞において特異的に発現する分子と考えられた．同様の検討を健常人の末梢血を用いて行った．ヒトでも同様にCD4+FoxP3+の細胞分画で発現が上昇し，特に活性化TregとされるCD44highCD62Llowのpopulationで発現が上昇していることが判明した．一方，naiveCD4, naiveCD8, Bcell, NKcell, 抗原提示細胞での発現は認めなかった．2. 腫瘍浸潤T細胞におけるFR4/CD73の発現解析マウス由来の癌細胞を皮下移植した各種モデルマウスを用いて，がん微小環境でのFR4/CD73の発現を解析した．melanoma細胞株であるB16F10細胞を皮下移植し，十分に腫瘍が大きくなったことを確認し，腫瘍および血液中のCD4+細胞，Treg細胞(CD25+細胞)をFACS AriaIIを用いてsortingし，qPCRによりmouse FR4/CD73の発現を検討した．結果：腫瘍浸潤Tregで最も発現が亢進していた．以上の結果よりFR4/CD73はTreg細胞，特に腫瘍に浸潤するTregにおいて特異的に発現を認める分子であることが判明した．

1. Analysis of FR4/CD73 expression by anergy regulation, identification of FR4/CD73 expression by immune cells, identification of C57BL6 expression by C57BL6 expression by FCS AriaII sorting, qPCR and western blot analysis of Nrn1 expression. Results: FR4/CD73 showed the highest increase in Treg(CD4 + CD25 + FoxP3 +). FR4/CD73 is a molecular marker for specific Treg cells and anergic T cells in immune cells. In the same way, the peripheral blood of healthy people is used in the study. CD4 + FoxP3 + cell profile increased in the same group, especially in the activated Treg and CD44 high CD62 low population. One side, naiveCD4, naiveCD8, Bcell, NKcell, antigen prompt cell Analysis of FR4/CD73 expression in tumor infiltrating T cells after subcutaneous transplantation of tumor cells, analysis of FR4/CD73 expression in microenvironment after subcutaneous transplantation of melanoma cell line B16F10 cells, confirmation of tumor size, identification of CD4 + cells in tumor and blood, Treg cells (CD25 + cells) by FACS AriaII sorting qPCR detection of mouse FR4/CD73. Results: Tumor infiltration Treg was the most active. The above results clarify that FR4/CD73 is a molecule specifically recognized by Treg cells, especially when infiltrating tumors.