内耳細胞死由来エクソソーム・DAMPsが海馬の空間情報処理に及ぼす影響の解明

阐明内耳细胞死亡产生的外泌体和 DAMP 对海马空间信息处理的影响

• 批准号: 22K09674
• 负责人: 林 賢
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09674/
• 关键词: 内耳細胞老化; オートファジー; SASP; 酸化ストレス; 内耳細胞死; エクソソーム; DAMPs; 老化ミクログリア

内耳細胞障害が、時空間認識能・記憶に与える直接的影響の分子レベルでの解明をするため、先ず内耳細胞老化モデル構築を試みた。その際、内耳培養細胞HEI-OC1を、酸化ストレス誘導剤である亜ヒ酸ナトリウム（NaAsO2）によって短時間曝露（100，250，500μM 1h）し、細胞生存率は保持された状態で内耳細胞増殖率は低下する内耳細胞老化誘導最適化条件（500μM 1h、0-48h）を確定した。この条件にて、細胞老化マーカーであるSA-βgal陽性細胞数は、vehicleと比較して有意に増加したことを確認した。細胞老化表現型の一つである細胞周期停止を確認するため、細胞周期阻害因子 p21, p16 をコードするCdkn1aとCdkn2aの mRNA 発現を解析した。NaAsO2 曝露 24 時間後では、Cdkn1a の mRNA 発現量が増加したが、Cdkn2a の mRNA 発現量は不変であった。p21もNaAsO2 曝露により増加することが示された)。次に、DNA の二重鎖切断のマーカーとして知られるリン酸化ヒストン H2AX (γH2AX) の免疫染色によりγH2AXタンパク質を標識すると、NaAsO2 曝露後に核内でのDNA 二重鎖切断を示すフォーカス数が増加していることを確認された。NaAsO2曝露後のHEI-OC1 細胞においても平坦化と膨隆化を特徴とする形態変化が見られた。さらに、老化随伴分泌因子 (Senescence-associated secretory phenotype ; SASP)関連遺伝子IL-6, IL-1β、CXCL10の発現亢進も認められた。これらの結果から、内耳培養細胞を NaAsO2に曝露すると、DDR及び増殖停止が起こり、複数の細胞老化表現型を呈することが示された。

Inner ear cell impairment, temporal spatial cognitive function, memory and direct impact of molecular changes in the understanding of the first inner ear cell aging structure test At this time, the optimal conditions for the induction of aging of inner ear cells (HEI-OC1) were determined by short-term exposure (100, 250, 500μM 1h) of HEI-OC1 cells to acid (NaAsO2), cell survival rate was maintained, proliferation rate of inner ear cells was decreased, and aging induction of inner ear cells was optimized (500μM 1h, 0-48h). The number of SA-βgal positive cells was increased intentionally by comparison. Cell cycle arrest was identified as a phenotype of cell aging, and mRNA expression of cell cycle inhibitors p21, p16, Cdkn1a and Cdkn2a was analyzed. After 24 hours of NaAsO2 exposure, Cdkn1a mRNA expression increased, Cdkn2a mRNA expression did not. p21-NaAsO2 exposure Secondly, immunostaining for γ H2AX (γ H2AX), which is known to cause double lock cleavage of DNA, identifies γ H2AX protein and confirms that the number of double lock cleavages of DNA in the nucleus increases after NaAsO2 exposure. HEI-OC1 cells after NaAsO2 exposure were characterized by flattening and swelling. Senescence-associated secretory phenotype (SASP) is associated with the expression of IL-6, IL-1β and CXCL10. The results showed that the growth of cultured cells in the inner ear was inhibited due to NaAsO2 exposure, DDR, and multiple cell aging phenotypes.

项目成果

Exosomal miRNA let-7b modulates the interaction between TLR7 and TRPA1, inducing hyperexcitability-induced cell death in auditory cell

外泌体 miRNA let-7b 调节 TLR7 和 TRPA1 之间的相互作用，诱导听觉细胞过度兴奋诱导的细胞死亡

• 发表时间: 2022
• 作者: Ken Hayashi;Hideaki Sakata
• 通讯作者: Hideaki Sakata

TFEBによるオートファジー・リソソーム経路活性化を介した内耳細胞老化制御メカニズムの解明

阐明TFEB激活自噬-溶酶体途径调节内耳细胞衰老的机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Ken Hayashi;Hideaki Sakata;林 賢
• 通讯作者: 林 賢

Fine-tuned cholesterol solubilizer, mono-6-O-α-D-maltosyl-γ-cyclodextrin, ameliorates experimental Niemann?Pick disease type C without hearing loss

微调胆固醇增溶剂，单-6-O-α-D-麦芽糖基-γ-环糊精，改善实验性尼曼？皮克病 C 型但无听力损失

• DOI: 10.1016/j.biopha.2022.113698
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biomedicine & Pharmacotherapy
• 影响因子: 7.5
• 作者: Yamada Y;Miwa T;Nakashima M;Shirakawa A;Ishii A;Namba N;Kondo Y;Takeo T;Nakagata N;Motoyama K;Higashi T;Arima H;Kurauchi Y;Seki T;Katsuki H;Okada Y;Ichikawa A;Higaki K;Hayashi K;Minami K;Yoshikawa N;Ikeda R;Ishikawa Y;Kajii T;Tachi
• 通讯作者: Tachi