Is CD109 useful as a biomarker or therapeutic target for head and neck cancer?

CD109 可用作头颈癌的生物标志物或治疗靶点吗？

• 批准号: 22K09749
• 负责人: 山下 拓
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09749/
• 关键词: CD109; REV7; ノックアウト; 癌細胞雄株; バイオマーカー; 頭頸部癌

中咽頭扁平上皮癌患者の摘出ないし生検の臨床検体を用いてp16免疫染色およびCD109免疫染色を行った。その結果、p16陽性中咽頭扁平上皮癌においてCD109陽性群はCD109陰性群と比較して無増悪生存率が有意に不良であることを確認した（p < 0.01）。またヒトp16陽性中咽頭癌細胞株においてCD109の強発現が認められることをWestern Blotで確認後、siRNAにてCD109発現をノックダウンしたところ、CD109ノックダウンp16陽性中咽頭癌細胞株では野生株に比較しインベージョンアッセイにおける腫瘍浸潤能の低下がみられた。p16陰性頭頸部扁平上皮癌細胞株であるHSC-3およびFaDu、p16陽性頭頸部扁平上皮癌であるUM-SCC-47およびUM-SCC-104を用い、シスプラチン感受性の検討に適切な細胞播種濃度およびシスプラチン濃度の条件を検討した。この条件検討はCD109ノックアウトによるシスプラチンに対する感受性の変化を今後検討するために必要である。また、上記の4種類の細胞株を用い、CRISPR-Cas9システムによる遺伝子導入、遺伝子導入に必要なプラスミド精製、遺伝子導入した細胞のセレクション、遺伝子導入した細胞のノックアウト効果検証に必要な条件検討および手技取得をそれぞれ行っている。現時点ではFaDuに対してリポフェクタミン試薬を用いたプラスミド法によるREV7のノックアウトとピューロマイシン耐性遺伝子導入を利用したセレクションの条件検討が達成できている。CD109のノックアウトの条件検討も並行して進めている。REV7のノックアウトに用いるプラスミドを精製するための大腸菌ノックアウトベクターは当大学の病理学教室が所有しているものを使用しているが、ノックアウトベクター作成および精製したプラスミドのシーケンス確認に関する手技は並行して取得中である。

In patients with squamous cell carcinoma of the middle pharynx, the な を body of the tumor was randomly extracted. The 検 clinical 検 body を was subjected to を てp16 immunostaining and およびCD109 immunostaining を for った. そ の those squamous cell carcinoma, in result, p16 positive に お い て CD109 positive group of は CD109 negative group of と compare し て no rights 悪 survival が deliberately bad に で あ る こ と を confirm し た (p < 0.01). The またヒト p16-positive middle pharyngeal cancer cell line にお てCD109 strongly shows が recognition of められる とを とを とをWestern Blot で confirmed, siRNA に て CD109 発 now を ノ ッ ク ダ ウ ン し た と こ ろ, CD109 ノ ッ ク ダ ウ ン p16 positive those cancer cells in で は wild strains に compare し イ ン ベ ー ジ ョ ン ア ッ セ イ に お け る swollen sores can infiltrate の low が み ら れ た. P16 negative for head and neck squamous cell cancer cells で あ る HSC - 3 お よ び FaDu, p16, head and neck squamous cell carcinoma で あ る UM - SCC - 47 お よ び UM - SCC - 104 を い, シ ス プ ラ チ ン susceptibility の beg に 検 appropriate な cell seeding concentration お よ び シ ス プ ラ チ の ン concentration conditions を 検 beg し た. こ 検 の conditions for は CD109 ノ ッ ク ア ウ ト に よ る シ ス プ ラ チ ン に す seaborne る susceptibility の variations change を 検 for future す る た め に necessary で あ る. ま た, written の の cell lines を 4 species use い, the CRISPR - Cas9 シ ス テ ム に よ る heritage 伝 child import, but 伝 import に necessary な プ ラ ス ミ ド refined, but 伝 import し た cells の セ レ ク シ ョ ン, but 伝 import し た cells の ノ ッ ク ア ウ ト unseen fruit 検 card に 検 な conditions necessary for お よ び manipulation made を そ れ ぞ れ line っ て い る . Now point で は FaDu に し seaborne て リ ポ フ ェ ク タ ミ ン try 薬 を with い た プ ラ ス ミ ド method に よ る REV7 の ノ ッ ク ア ウ ト と ピ ュ ー ロ マ イ シ ン patience heritage 伝 son import を using し た セ レ ク シ ョ ン 検 の conditions for が reach で き て い る. CD109 <s:1> ノッ アウト アウト <s:1> conditions 検 ask for アウト in parallel <s:1> て into めて る る る. REV7 の ノ ッ ク ア ウ ト に with い る プ ラ ス ミ ド を refined す る た め の coliform ノ ッ ク ア ウ ト ベ ク タ ー は when が の pathology at the university of classroom all し て い る も の を use し て い る が, ノ ッ ク ア ウ ト ベ ク タ ー made お よ び refined し た プ ラ ス ミ ド の シ ー ケ ン ス confirm に masato す る manipulation は parallel し て obtained in で あ る.