DNA損傷トレランスタンパク質REV7を介した紫外線誘発皮膚癌の発生機序の解明

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本研究の目的は、紫外線が誘発する皮膚癌の発生にREV7が関与していることをマウス個体レベルで証明し、そのメカニズムを細胞・組織レベルで明らかにすることである。本年度は細胞レベルの解析として、各種遺伝子型のケラチノサイト細胞株（野生型、Polh欠損型、Rev7欠損型、Polh/Rev7二重欠損型）に対して紫外線損傷に誘発される変異頻度の解析を行った。紫外線損傷が存在しない場合、変異頻度が低く、各種遺伝子型間で差は認められなかった。一方、紫外線損傷が存在する場合、すべての遺伝子型で変異頻度の上昇が見られた。その中で、Rev7欠損型細胞は野生型細胞よりも低い変異頻度を示した。また、Polh欠損型は野生型よりも高い変異頻度を示したが、Rev7を欠損させることで変異頻度が抑制された。このことから、野生型細胞やPolh欠損型細胞で誘発される変異にREV7が関与していることが示唆された。個体レベルの解析として、Polh/Rev7二重遺伝子改変マウスの作出を行った。当初使用する予定だったRev7ホモ欠損マウスが胎生致死を示したため、コンディショナルノックアウト（cKO）マウスを用いることにした。皮膚特異的にREV7を欠損させるために、K5プロモーター下でCreを発現するトランスジェニックマウス（K5-Cre）を熊本大学生命資源研究・支援センターより入手した。これらのマウスの交配を進めることで、Polh/Rev7cKO/K5-Creマウスを作出し、紫外線照射に対する応答の解析を進める予定である。