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歯周病原細菌などのバクテロイディア綱細菌固有のリポタンパク質輸送機構の解明

阐明牙周病原体等拟杆菌科细菌特有的脂蛋白转运机制

基本信息

批准号：
22K09941
负责人：
雪竹英治
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09941/
关键词：
歯周病細菌線毛リポタンパク質歯周病細菌

项目摘要

ジンジバリス菌のリポタンパク質を菌体表面に分泌させるレポーター系の構築に成功した。具体的には、本菌のFim線毛の主要構成タンパク質であるFimAをモデルとして、FimAのN末端側50アミノ酸にルシフェラーゼを結合させるもの(FimAsigN-nLuc),さらにC末端にHisタグをつけたもの(FimAsigN-nLuc-His),リポタンパク質結合サイトである19番目のシステインをアラニンに置換したもの(FimAsigNC19A-nLuc-His)を構築し、mfa1mfa2遺伝子内に挿入し異所性にかつanhydrotetracycline(aTC)の誘導剤添加による一過性の発現系を構築した。その結果、aTC添加存在下でFimAsigN-nLuc, FimAsigN-nLuc-Hisは培養上清/菌体の比率がともに30倍以上であった。一方、FimAsigNC19A-nLuc-Hisは同条件下で培養上清/菌体の比率は約0.25倍であった。培養上清と菌体に分画して抗His抗体でも同様の知見が得られた。次に、外膜を通過するメカニズムについて検討した。これまでに脂質が修飾されるシステイン以降の極性アミノ酸が外膜通過に重要であることが報告されている。上記の系で19番目のシステイン以降の極性アミノ酸、KDEEEを5つのアラニンに置換したもの、KDEを3つのアラニンに置換したものについて、aTC添加存在下で発現させたのち培養上清と菌体に分画して抗His抗体で分泌の有無を調べた。その結果、上記2つの置換体は培養上清に分泌されないことがわかった。一方、大腸菌でFimAsigN-nLuc-HisをIPTGで一過的発現を行っても培養上清に分泌することはなかった。つまり、FimAタンパク質の19番目のシステイン以降の極性アミノ酸が外膜通過に重要であること、また本菌特有であることがわかった。

The bacteria were secreted on the surface of the bacteria, and the bacteria were successful. The specific Fim hairs of this fungus are mainly divided into two parts: FimA, FimAsigN-nLuc, FimA, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, 50, FimAsigN-nLuc, FimAsigN-nLuc, FimAsigN-nLuc-His, respectively. In combination with each other, you need to know that you need to add information on your sexuality, such as anhydrotetracycline (aTC), in the mfa1mfa2 sub-system, and in the mfa1mfa2 subsystem. The results showed that the addition of aTC contained lower FimAsigN-nLuc, and the ratio of supernatant to bacterial culture of FimAsigN-nLuc-His was more than 30 times higher. On the other hand, the ratio of supernatant to bacterial culture was about 0.25 times higher than that of FimAsigNC19A-nLuc-His under the same conditions. The culture supernatant was divided into anti-His antibody, anti-HBeAg antibody and anti-CD8 antibody. In the second place, the adventitia is affected by the operation of the membrane. In order to reduce sexual acidity, the adventitia passes through the important information reports. The record above shows that there is no significant difference in the secretion of anti-His antibodies in the supernatant of bacteria in order to reduce the concentration of His in the supernatant of bacteria in order to reduce the concentration of His, KDEEE, KDEEE5, K The results showed that the supernatant of the body culture was secreted in the upper part of the body at the end of the second week. On the one hand, the supernatant was secreted by the supernatant of the fungus FimAsigN-nLuc-His IPTG. In order to reduce sexual acidity, the adventitia passed through the important bacteria in the outer membrane, and the bacteria were unique to this fungus. In order to reduce the disease, the adventitia passed through the important bacteria, and the bacteria were unique to the bacteria.