歯根膜コラーゲンのプロテオスタシス制御に基づく新規歯周治療法の開発

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歯根膜は細胞外基質タンパクを大量に産生しており、とりわけコラーゲンの生合成が活発な組織である。細胞内のタンパク恒常性を維持するためには、その合成と分解のみならず、立体構造の安定化（フォールディング）による量や質の管理が不可欠である。加齢により環境ストレスが蓄積した歯根膜では、分解系のひとつであるオートファジーやフォールディングの異常が推察されるが、その詳細は不明である。本研究では、コラーゲン特異的なシャペロン分子（HSP47）に着目し、加齢が歯根膜細胞のコラーゲンタンパクのプロテオスタシスに及ぼす影響を検討した。申請者はこれまでの研究により、歯根膜におけるオートファジーの異常がコラーゲン代謝に影響を及ぼし、硬組織形成に関係することを報告している。本研究において、2022年度は、ヒト歯根膜細胞のHSPsならびにHSP47活性が成熟コラーゲンの産生と変性コラーゲンの蓄積に及ぼす影響を、各種のHSPsの誘導剤あるいは阻害剤、HSP47のsiRNAを用いて検討した。HSPs活性がヒト歯根膜細胞の成熟コラーゲンの産生に及ぼす影響を検討するために、ELISA法を用いた解析を行った。また、HSPs活性の低下がヒト歯根膜細胞のコラーゲン代謝に及ぼす影響を検討するために、蛍光プローブCollagen Hybridizing Peptide(CHP)を用いて変性コラーゲンを標識し、共焦点顕微鏡観察で評価した。