口腔粘膜上皮ポラリティの喪失と異型上皮フィールドの成立

点击翻译按钮获取中文摘要

口腔粘膜上皮に発症する口腔癌は、早期に浸潤・転移を起こして生命を脅かす。健常な上皮組織には、異常細胞を排除する仕組みが備わっているが、実際には異常細胞が広がって癌の前駆状態となることが多い。我々は、この要因として「組織損傷と修復応答」に着目している。本研究では、上皮細胞の集合体（スフェロイド）やマウス舌粘膜の潰瘍・粘膜炎モデルを用いて、組織修復過程での異常細胞の進展機序解明を目指す。実験系では、変異（異型）上皮の認識・排除に働く分子機序について検証するとともに、口腔粘膜での異型上皮領域の成立に繋がる環境要因を明らかにすることを目的としている。初年度となる今回は、in vitro口腔上皮モデルの作出を目的として、不死化ケラチノサイトを用いた粘膜上皮スフェロイド・オルガノイドの作製を行った。スフェロイドに関しては、低接着性培養プレートを使用して48～72時間培養することで、小型で安定した形状の粘膜上皮スフェロイドを作製できた。また、不死化ケラチノサイトのハイドロゲル埋入培養では、増殖因子存在下で基底細胞様細胞が増殖し、増殖因子を取り除いて追加培養すると角化傾向を示すことが確かめられ、培養期間延長に伴って角化物形成が増加することを明らかにできた。また、マウス舌粘膜の潰瘍・粘膜炎モデルの予備検討では、麻酔下にてマウス舌の側縁部を歯科用クレンザーで擦過し、擦過回数と回収可能な細胞数の関連性を確かめた。今後は、異型上皮の認識・排除に働く分子機序を検証するin vitroモデルとして、不死化ケラチノサイトに変異誘発剤を感作させてランダム変異を誘導、クローニングして変異細胞ライブラリーの構築を目指す。これらの変異細胞の使用を前提として、粘膜上皮スフェロイドと線維芽細胞をハイドロゲル埋入して培養することにより、オルガノイド培養モデルを作出していく。