脱細胞化肺移植による先天性横隔膜ヘルニアの低形成肺に対する再生医療

利用脱细胞肺移植治疗先天性膈疝所致肺发育不良的再生医学

• 批准号: 26462709
• 负责人: 永田 公二
• 金额: $ 3.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-26462709/
• 关键词: 肺発達; 脱細胞化; 間葉系幹細胞; 肺移植; 再生医療

本年度も引き続き、ニトロフェン誘導CDHモデルラット肺を利用して、肺組織の脱細胞化及び脱細胞化組織への間葉系幹細胞、新生肺の肺移植培養実験を企画した。本実験の工程は3工程に分かれる。即ち、１）肺の脱細胞化、２）脱細胞化肺への間葉系幹細胞投与、３）肺移植である。１）肺の脱細胞化：妊娠22日目の母獣を犠死せしめる際に母獣の内頸静脈と総頸動脈にカニュレーションし、内頸静脈より還流液である0.1%SDS溶液を2時間還流した後に胎仔肺を摘出した。その後、Western-blottingによって肺サーファクタントなどの肺に特異的分子のDNA数が減少している事を確認した。２）間葉系幹細胞投与：間葉系幹細胞はプロトコールに従って抽出されたものを使用した。即ち、eGFP成獣肺から摘出した肺をPBSで洗浄して血液をウォッシュアウトした後に気管と結合組織を除去し、肺組織を潰し、0.4%のⅠ型コラーゲンと0.3%のディスパーゼⅡを37℃で1時間培養し、70μlのcell strainerに搭載して抽出した。細胞は24時間培養後にディッシュに接着する細胞のみを20% FBSに投与して培養した。細胞がディッシュ内に充満した後にpassageを確認した。得られた細胞は、間葉系細胞の特徴である紡錘形を有し、ディッシュに接着すること、免疫染色で多分化能を有すること、フローサイトメトリーでCD29陽性、CD45陰性である事を確認した。脱細胞肺への間葉系幹細胞の投与を試みたものの、脱細胞化肺自体の長期間培養は困難であり、間葉系幹細胞投与は困難であった。３）肺移植：当初、予定であった肺移植実験は、脱細胞化肺の長期培養が困難であった事から移植自体が不可能であり、困難であった。

This year, we will introduce new technologies to induce CDH in lung tissue, and plan for the development of lung transplantation culture with mesenchymal stem cells and decellularized lung tissue. This project is divided into three parts. 1) decellularization of lung, 2) transplantation of mesenchymal stem cells from decellularized lung, 3) transplantation of lung. 1) Decellularization of lung: On the 22nd day of pregnancy, the mother died, and the mother's internal jugular vein and carotid artery were removed. The internal jugular vein was returned to the fluid. The 0.1% SDS solution was removed after 2 days. The number of DNA molecules specific to the lung was reduced after Western-blotting. 2) Mesenchymal stem cell injection: Mesenchymal stem cells are used in vitro. In other words, eGFP was extracted from the lung by PBS, and the blood was washed. After the removal of the tissue, 0.4% of the type I cells were removed from the lung tissue, and 0.3% of the cells were removed from the lung tissue. 70μl of the cells were cultured at 37℃ for 1 time. After 24 hours of culture, the cells were cultured in 20% FBS. The cell phone is in the middle of the room and the passage is confirmed. CD29 positive and CD45 negative were identified by immunostaining. It is difficult to culture the cells of mesenchymal stem cells from decellularized lung for a long time. 3) Lung transplantation: At the beginning, it is difficult to transplant lung transplantation and long-term culture of decellularized lung.

项目成果

胸腔鏡下横隔膜ヘルニア根治術を施行した先天性横隔膜ヘルニアの1例

胸腔镜膈疝根治术治疗先天性膈疝1例

• 发表时间: 2015
• 作者: Nagata K;Usui N;Terui K;Itou M;Yamoto M;Shiraishi M;Toyoshima K;Taguchi T;永田公二,和田桃子,福原雅弘,栗山直剛,家入里志,田口智章
• 通讯作者: 永田公二,和田桃子,福原雅弘,栗山直剛,家入里志,田口智章

周産期医療現場における小児外科医の倫理的諸問題

围产医学中小儿外科医生的道德问题

• 发表时间: 2014
• 作者: 永田公二;照井慶太;伊藤美春;白石真之;矢本真也; 早川昌弘;奥山宏臣;稲村 昇;金森 豊;五石圭司; 田附裕子;横井暁子;川瀧元良 ;漆原直人;岡崎任晴; 木村 修;増本幸二;豊島勝昭;臼井規朗;田口智章;永田公二,和田桃子,江角元史郎,木下義晶,田口智章
• 通讯作者: 永田公二,和田桃子,江角元史郎,木下義晶,田口智章

軟性気管支鏡ガイド下挿管が有用であった先天性横隔膜ヘルニアの2例

软性支气管镜引导下插管先天性膈疝二例

• 发表时间: 2015
• 作者: Yuniartha R;Alatas FS;Nagata K;Kuda M;Yanagi Y;Esumi G;Yamaza T;Kinoshita Y;Taguchi T.;永田公二,岩中剛,神保教広,江角元史郎,山下さきの,田口智章;永田公二,岩中剛,三好きな,江角元史郎,木下義晶,田口智章;Nagata K,Iwanaka T,Miyoshi K,Esumi G,Kinoshita Y,Taguchi T.;永田公二,江角元史郎,岩中剛,木下義晶,田口智章;永田公二,江角元史郎,岩中剛,木下義晶,田口智章
• 通讯作者: 永田公二,江角元史郎,岩中剛,木下義晶,田口智章

The timing of surgery and the endoscopic surgery for CDH neonates: update by means of a systematic review and a meta-analysis

CDH新生儿的手术时机和内镜手术：通过系统评价和荟萃分析进行更新

• 发表时间: 2015
• 作者: Nagata K;Usui N;Terui K;Itou M;Yamoto M;Shiraishi M;Toyoshima K;Taguchi T
• 通讯作者: Taguchi T

Reevaluation of acetylcholinesterase staining for the diagnosis of hirschsprung disease and allied disorders.

重新评估乙酰胆碱酯酶染色对先天性巨结肠及相关疾病诊断的作用。

• DOI: 10.1097/mpg.0000000000000664
• 发表时间: 2015
• 期刊: J Pediatr Gastroenterol Nutr
• 作者: Budianto IR;Obata S;Kinoshita Y;Yoshimaru K;Yanagi Y;Miyata J;Nagata K;Ieiri S;Taguchi T
• 通讯作者: Taguchi T