In vitro免疫法とパッチクランブ法を用いた歯髄細胞の生体警告系の解析

体外免疫和膜片钳法分析牙髓细胞生物预警系统

• 批准号: 08877285
• 负责人: 池田 英治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877285/
• 关键词: 象牙芽細胞; モノクローナル抗体; パッチクランブ法; 歯髄; in vitro 免疫法; パッチクランプ

1.象牙芽細胞標識モノクローナル抗体象牙芽細胞をラベルするモノクローナル抗体の産生に成功した(IgG3種とIgM1種)。これらモノクローナル抗体のラベリングの局在を透過型電子顕微鏡レベルで解明しようと試み、3種で成功した。IgG抗体(1)は象牙芽細胞の細胞質全域を;IgG抗体(2)は表面マーカーで、細胞膜のみをラベルした。IgG抗体(4)は象牙芽細胞細胞質、dendritic cell細胞質、血管内皮細胞細胞質を染めることを明らかにした。これらの抗体を用いて単離歯髄細胞中で象牙芽細胞を科学的に同定することができるようになった。2.象牙芽細胞膜の電気生理学的特性最適細胞外液をはじめ新鮮単離象牙芽細胞を長く生かす方法を検討した。その結果、電極内をHEPE溶液に電極外をりん酸緩衝液(オスモラリティー325)が最適であった。この後、ギガΩレベルのシールを獲得し、シングルチャンネル記録を行った。陰圧あるいは電気ショックを用いても、タフな象牙芽細胞の細胞膜に穿孔することはできなかった。そこで、ナイスタチンを用いて化学的に象牙芽細胞に穿孔し、細胞全体からの記録を可能にした。I-V関係はほぼ直線で、電位依存性のチャンネルは検出できなかった。3.象牙芽細胞膜と他の細胞とのcoupling歯髄細胞を単離すると希に象牙芽細胞と別の細胞がくっついて分離されることがある。一方(象牙芽細胞)にガラス微小電極を介して、低分子の色素を注入すると他の細胞(樹状の細胞)に色素が広がることがわかった。象牙芽細胞は別の細胞と機能的に結合している可能性が示された。

1. The ivory bud cells logo モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody ivory bud cells を ラ ベ ル す る モ ノ ク ロ ー ナ antibodies ル の に successful し た (IgG3 と IgM1 species). こ れ ら モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の ラ ベ リ ン グ の bureau in を through type electronic 顕 micromirror レ ベ ル で interpret し よ う と み, three で successful し た. IgG antibody (1) <s:1> cytoplasmic whole domain of ivory bud cells を; The surface of IgG antibody (2) カ カ で で and the cell membrane みをラベ みをラベ た た た. IgG antibody (4) を staining of ivory bud cell cytoplasm, dendritic cell cytoplasm, vascular endothelial cell cytoplasm める とを staining める た とを ら に に た た. を こ れ ら の antibody with い て 単 from 歯 を で ivory bud cells in marrow cells with scientific に set す る こ と が で き る よ う に な っ た. 2. The most suitable extracellular fluid for the physiological properties of the cell membrane of ivory bud cells is を じめ じめ fresh 単 ivory bud cells を growth く す す す method を検 to obtain ivory bud cells た Youdaoplaceholder0 そ results: The をHEPE solution inside the electrode に the を ん acid buffer solution outside the electrode (スモラリティ スモラリティ <s:1> 325)が is the most suitable であった. , after こ の ギ ガ Ω レ ベ ル の シ ー ル を し, シ ン グ ル チ ャ ン ネ ル record line を っ た. Yin 圧 あ る い は electric 気 シ ョ ッ ク を with い て も, タ フ な ivory bud cells の に cell membrane perforation す る こ と は で き な か っ た. そ こ で, ナ イ ス タ チ ン を with い て chemical に ivory bud cells に perforated し, all か ら の record を に し た. The I-V relationship チャ ほぼ straight line で and potential dependence <s:1> チャ ネ で で 検 検 検 give で な な った った った った った 検 検 検. 3. Ivory bud cell membrane と he の cells と の coupling 歯 marrow cells を 単 from す る と bush に ivory bud cells don't の と が く っ つ い て separation さ れ る こ と が あ る. One party (ivory bud cells) に ガ ラ ス を tiny electrode interface し て を injection and low molecular の pigment す る と he の cells (tree の cells) に pigment が hiroo が る こ と が わ か っ た. The に binding to the と function of the と of ivory bud cells て the る る possibility が indicates された.

项目成果

Ikeda H.et al.: "Patch-clamp recording from cat pdontoblasts identified with monoclonal anti bodies" J.dent.Res.76(Spec Iss). 171-171 (1997)

Ikeda H.等人：“用单克隆抗体鉴定的猫成牙本质细胞的膜片钳记录”J.dent.Res.76(Spec Iss)。

H,Ikeda et al.: "Capsaicin sensitive As fibers in cat tooth pulp" J,dent Res.(in press).

H，Ikeda 等人：“猫牙髓中的辣椒素敏感纤维”J，dent Res.（印刷中）。

山本寛. 池田英治ら: "痛みのメカニズム4,象牙質知覚過敏症" 歯界展望. 89(1). 147-160 (1997)

Hiroshi Yamamoto. Eiji Ikeda 等人：“疼痛机制 4，牙本质过敏”Dental Perspective 89(1)。

Ikeda H.et al.: "Monoclonal antibodies to odonto blasts raised by in vitro immunzation" Dentin/Pulp Complex. 325-326 (1996)

Ikeda H.等人：“体外免疫产生的针对牙本质细胞的单克隆抗体”牙本质/牙髓复合物。

Ikeda H., et al.: "Patch-clamp recording from cat odontoblasts identified with vaonoclonal antibodies" J.dent Res. 76(Spec). 171-171 (1997)

Ikeda H. 等人：“用 vaonoclonal 抗体鉴定的猫成牙本质细胞的膜片钳记录”J.dent Res。