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悪性症候群発症におけるリアノジン受容体3型アイソフォームの関与

兰尼定受体 3 型亚型参与恶性综合征的发生

基本信息

批准号：
09878184
负责人：
小川靖男
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

悪性症候群は抗精神病薬使用に伴う最も重篤な副作用であり、その発症機序は不明であるが、ドーパミン受容体との関連が広く考えられている。しかしその治療薬としてダントロレンが有効であることから、線条体神経細胞に特異的に局在するCa遊離チャネル蛋白であるリアノジン受容体RyRの3型アイソフォームRyR3の関与も考えられる。この可能性を検討するため、昨年度はRyR3が多く存在すると云われている脳、横隔膜を用いて、特異的抗体を用いた免疫沈降法を用いて、RyR3の特性を間接的に検討してきた。本年度は横隔膜よりRyR3を単離精製し、その特性を直接検討することを目指した。RyRの活性は反応溶液の組成により大きく影響されるので、塩の種類、その濃度および種々のpolyolの効果を検討した。単純なイオン強度や浸透圧により規定されるのではなく、タンパク質分子表面と水分子との相互作用が重要であることが分かった。またskinned fiberを用いた実験から小胞体内腔のCa^<2+>が負の制御をすることが示唆された。その機序の一つとして小胞体内腔から放出されたCa^<2+>がRyRの抑制性部位に作用することも考えられる。RyR3の精製は横隔膜より筋小胞体画分を調製、CHAPSとりん脂質存在下に可溶化、蔗糖密度勾配遠心によりRyR四量体を多く含む画分を分取し、抗RyR3抗体結合アガロースビーズと反応させ、RyR3を免疫沈降する。よく洗浄後大量の抗原ペプチドを加え、RyR3を溶出させる。Centri-Sepカラムを用いて、RyR3を精製した。[^3H]リアノジン結合活性で調べると既報の結果を多く再確認できた。しかしMg^<2+>による抑制は高濃度のCa^<2+>による抑制と同程度であり、これは前回の結果と異なるものであった。りん脂質二重膜に組み込んで測定したチャネル活性のCa^<2+>依存性は[^3H]リアノジン結合のそれと異なり、その原因を検討中である。

The most severe side effects associated with antipsychotic use are unknown. The treatment of RyR has been studied in relation to the type 3 receptor of RyR, which is specific to Ca-free protein in linear neurons. This possibility is discussed in detail in the past year. RyR3 has been found to exist in many different ways. The membrane is used in the study. Specific antibodies are used in the study. The characteristics of RyR3 are discussed indirectly. This year, RyR3 was refined and its characteristics were directly discussed. RyR activity is affected by the composition of the reaction solution, the type of reaction, the concentration of reaction and the effect of polyol. The interaction between pure water molecules and surface water molecules is important. Skinned fiber is used to control the negative Ca^<2+> in the microcellular cavity. The mechanism of this process is that Ca^<2+> is released from the intracellular cavity of the small cell, and the inhibitory site of RyR is affected by this process. RyR3 is purified from membrane, soluble in CHAPS and lipids, isolated from sucrose density, isolated from RyR3 tetrasomes, bound to anti-RyR3 antibodies, and immunoprecipitated from RyR3. After washing, a large number of antigens were added, and RyR3 was dissolved. Centri-Sep 2014 - 2015 [^3H] The combination of active and inactive substances is reconfirmed. Mg^<2 +> is inhibited by Ca^<2+> at high concentrations. The Ca^<2+> dependence of lipid bilayer membrane activity was determined and the reasons for the differences in lipid bilayer membrane binding were discussed.