血管平滑筋の収縮弛緩調節機序

调节血管平滑肌收缩和舒张的机制

• 批准号: 04263236
• 负责人: 小川 靖男
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04263236/
• 关键词: 大動脈平滑筋; スキンドファイバー; latch bridge; ミオシン軽鎖; りん酸化; ミオシン軽鎖キナーゼ; 蛋白ホスファターゼ

血管平滑筋における所謂latch bridgeの分子機序を研究する目的で、その実験モデルを作製するため、ウサギ大動脈Triton X-100処理スキンドファイばーをCa^<2+>により収縮させた後、ADPを含むph6.0の酸性溶液で30-40分間処理するとミオシン軽鎖LCの高度のリン酸化を伴ったCa^<2+>非依存性持続的張力を発生することを見出し、その特性について昨年度報告した。今年度はその分子機序について引き続き研究した。ウサギ大動脈標本では弾性要素の寄与が大きく、quick-release法による解析はできなかったが、細い腸間膜動脈標本を用いて検討したところ、Ca^<2+>非依存性の持続的張力はactiveな過程により怠起されることが明らかになった。短縮速度はCa^<2+>依存性の場合の約半分であり、これが高度のLCりん酸化によるものなのか、短にpH6.0の溶液で処理したためなのかはさらに検討しなければならない。次に[γ-^<32>P]ATPを用いてLCりん酸化部位を標識し、SDS-PAGE及びelectroblottingにより単離した標識LCをトリプシン限定分解後、標識部位を含むペプチドのマッピングを行うとCa^<2+>による収縮の場合と同様のペプチドマッピングパターンが得られ、酸性ADP溶液処理後のりん酸化はミオシン軽鎖キナーゼ活性によると考えられた。更にCa^<2+>による収縮標本及び酸性ADP溶液処理標本でのりん酸化LCの脱りん酸化速度を測定したところ、後者の場合は前者の約1/20であることが判った。即ち、酸性ADP溶液で処理することによりLCホスファターゼ活性が著しく抑制され、そのために高度りん酸化レベルを伴った持続的張力発生が生じると推定される。一方、平滑筋の収縮弛緩調節機構を再検討する手始めとして、ニワトリ砂嚢よりミオシンBをとり、江橋の方法によりこのミオシンBを脱感作した。この際に取り除かれた成分より脱感作ミオシンBをCa^<2+>感受性にする因子を精製した。この因子はカルモデュリン依存性であること、MLCK活性を示すこと、SDS-PAGE上での移動度はMLCKとほぼ同じであることなどが判った。LCりん酸化は今迄唱えられているように収縮に本質的なのかあるいは単なる随伴現像なのか、多角的に検討して行きたい。

The molecular mechanism of the so-called latch bridge in vascular smooth muscle was studied for the purpose of controlling the growth of vascular smooth muscle. Triton X-100 was used to treat vascular smooth muscle. ADP is a highly acidic solution containing pH 6.0 and is processed in 30-40 minutes. The high degree of acidification of LC is accompanied by Ca^<2+>-independent maintenance tension. This year's molecular mechanism is being studied. The relationship between the reactive elements and the active processes is analyzed by the quick-release method, and the relationship between the reactive elements and the active processes is analyzed by the quick-release method. The shortening rate is Ca^<2+> dependent, and the pH of the solution is 6.0. The following [γ-^<32>P]ATP was used to identify the acidified site. SDS-PAGE and electroblotting were used to identify the acidified site. After decomposition, the identified site was identified. Ca^2+&gt; was used to reduce the activity of the acidified site. In addition, Ca &lt;2+&gt; solution treatment and acid ADP solution treatment of Li Li, the acid LC and the acid removal rate were determined, the latter case was about 1/20 of the former. That is, the acid ADP solution treatment can inhibit the activity of LC, increase the acidity of LC and increase the tension generation of LC. A smooth muscle contraction and relaxation adjustment mechanism is discussed again. In this case, the composition of the enzyme is removed, and the sensitivity factor is refined. This factor is dependent on MLCK activity and mobility on SDS-PAGE. LC is still in the middle of the song, but it is still in the middle of the song, and it is in the middle of the song.

项目成果

Morimoto,S. & Ogawa,Y.: "Effect of ADP treatment on the contraction of skinned aortic smooth muscle fibres." J.Muscle Res.Cell Motil.1後. 484-485 (1992)

Morimoto, S. 和 Okawa, Y.：“ADP 治疗对带皮主动脉平滑肌纤维收缩的影响”，J.Muscle Res.Cell Motil.1 后，484-485。

Morimoto,S. & Ogawa,Y.: "Mechanism of Ca^<2+> insensitive sustained comtraction with full myosinlight chain phosphorylation of skinned rabbit aortic smooth uscles." Jpn.J.Pharmaclo.58. 298 (1992)

森本，S.

森本 幸生: "血管平滑筋の収縮制御機構" BIO medica. 7. 531-534 (1992)

Yukio Morimoto：“血管平滑肌的收缩控制机制”BIO medica. 7. 531-534 (1992)。

小川 靖男: "Fura-2法の問題点" Clinical Calcium. 2. 722-723 (1992)

Yasuo Okawa：“Fura-2 方法的问题”临床钙 2. 722-723 (1992)。

小川 靖男: "平滑筋作用薬" 医科薬理学第2版第2刷. 361-374 (1993)

小川康夫：《平滑肌激动剂》医学药理学第 2 版第 2 版印刷（1993 年）。