環状酵母人工染色体(YAC)移入による癌抑制遺伝子の同定

通过环状酵母人工染色体（YAC）转移鉴定抑癌基因

• 批准号: 09878201
• 负责人: 福重 真一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878201/
• 关键词: マイクロサテライトマーカー; アレロタイプ解析; 癌抑制遺伝子; YAC transfer; Cre-lox部位特異的組換え; TAR法; APC遺伝子; contact inhibition; YAC trasfer; DNA多型性マーカー

本研究は、遺伝子機能の欠損を原因とする疾患において、その原因遺伝子単離へのアプローチとして、欠損遺伝子を含むと考えられる環状のYACDNA断片を作製後、細胞に導入し、病態が修正されるかどうか検討することにある。本年度は、まず、マイクロサテライトマーカーを用いたアレロタイプ解析により膵癌の癌抑制遺伝子の候補領域として、第6番染色体長腕における共通欠失領域を3箇所同定し、その中でも最も高頻度(69%)のLOHを認めた領域(D6S449-D6S283)を6q21の500-kbに絞り込むことに成功した。また、胃癌、肺癌においてもアレロタイプ解析により16q24に共通欠失領域を見出した。次に、昨年まで検討していたCre-lox部位特異的組換えにより、環状のYACクローンを得るという方法から、より直接的で簡便な方法としてTransformation Associated Recombination(TAR)法によりヒトのゲノムDNAからマイクロサテライトマーカー周辺の塩基配列の情報だけを頼りに共通欠失領域を含む環状YACクローンを得ることを考案した。TAR法ではYACベクターに共通欠失領域を決める2つのマーカー周辺の塩基配列を挿入し、ヒトゲノムDNAと共に酵母細胞に導入し、酵母の高率な相同組換えを利用して2つのマーカー間のクローニングを行なう。しかしながら、今現在、期待されるYACクローンを得るに至っていない。その原因として、マイクロサテライトマーカー周辺の知られている塩基配列が200-300bpと短いため、酵母において特異的な領域での相同組換えの頻度が低いことが考えられる。マーカー周辺の塩基配列を決定し、より長いユニークなDNA断片をベクターに挿入するなどの改良を加えることが今後の課題である。

This study is aimed to investigate the causes of defective gene function, the causes of defective gene function, the mechanisms of defective gene function, and the mechanisms of defective gene function. This year, three common missing domains were identified in the candidate domain of cancer suppressor gene, chromosome 6 long arm, and LOH recognition domain (D6S449-D6S283) with the highest frequency (69%), 6q21 and 500-kb. The common missing area of gastric cancer and lung cancer was found on 16q24. In the past year, we have discussed the method of direct and simple Transformation Associated Recombination(TAR) method for identifying the common missing domain containing cyclic YAC. TAR method can be used to determine the common missing domain of YAC, to introduce DNA into yeast cells, to increase the rate of yeast cell transformation, and to utilize the common missing domain of YAC. Today, I am looking forward to seeing you again. The reason for this is that the frequency of the same group in the specific field of yeast is low, and the frequency of the same group in the specific field is low. The sequence of DNA fragments was determined and improved.

项目成果

Sato,M.: "Identification of a 910kb region of common allelic loss in chromosome bands 16q24.1-q24.2 in human lung cancer" Genes Chrom.Cancer. (in press).

Sato,M.：“人类肺癌染色体带 16q24.1-q24.2 中常见等位基因丢失的 910kb 区域的鉴定”Genes Chrom.Cancer。

Mori,Y.: "Chromosome band 16q24 is frequently deleted in human gastric cancer." Br.J.Cancer. (in press).

Mori,Y.：“在人类胃癌中，染色体带 16q24 经常被删除。”

Abe,T: "Identification of three commonly deleted regions on chromosome arm 6q in human pancreatic cancer." Genes.Chrom.Cancer.(in press).

Abe,T：“人类胰腺癌染色体臂 6q 上三个常见缺失区域的鉴定。”

Sato,M.: "Identification of a 910 kb region of common allelic loss in chromo-some bands 16q24.1-q24.2 in human lung cancer" Genes Chrom.Cancer. 22. 1-8 (1998)

Sato,M.：“人类肺癌染色体带 16q24.1-q24.2 中常见等位基因丢失的 910 kb 区域的鉴定”Genes Chrom.Cancer。