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Yeast One Hybrid法によるJC virus複製機構の検討

使用 Yeast One Hybrid 方法检查 JC 病毒复制机制

基本信息

批准号：
08877044
负责人：
長嶋和郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877044/
关键词：
JCウイルス NF-1 転写因子 Callular tropism microinjection regulatory region PML 髄液診断 JC virus yeast one-hybrid system X archetype JC COS-7 cellular tropism

项目摘要

1.Clontech(Palo Alto,CA)社のyeast one-hybrid system)を用いてJC virus NF-1領域に特異的に結合する蛋白を同定した。NF-1配列を用いたスクリーニングで30個の陽性クローンから4個はこれまでにdata baseに登録されていない未知遺伝子であったためにこのDNA配列を確認し、NF-1/Xをcloningし、その発現が脳に多いことを示した。2.ヒトに無症候性に感染し、常時尿に排泄されている型Archetype JC virusであるCY株(調節領域が原始型)がCOS-7細胞で増殖することを見いだし、この細胞を用いた解析系を樹立した。Mad-1(調節領域がPML型)と調節領域をCYに変えたキメラウイルスCY/Mad-1で感染性を調べ、cellular tropsimに調節領域が関与していることを示した。3.Microinjection法により非感受性細胞であるCOS7でも細胞膜を越えてvirusを注入するとvirusの増殖が見られることから、virus感染に細胞膜因子が存在することを示唆した。4.過去2年間に日本国内にて発症が確認されたPMLの5症例のregulatory regionを解析し、4例のPML型と1例のArchetype JCの症例を見い出し、報告した。またPMLの髄液を用いたPCRによる診断方法を確立した。

1. Clontech's (Palo Alto,CA) yeast-one-hybrid system uses JC virus NF-1 domain-specific binding proteins. NF-1 DNA alignment was confirmed by cloning and discovery of 30 positive clones and 4 negative clones in the data base. 2. No symptomatic infection, regular urinary excretion, middle type Archetype JC virus, CY strain (regulatory domain is primitive), COS-7 cell proliferation, middle type JC virus, COS-7 cell proliferation, middle type JC virus, COS-7 cell proliferation, COS-7 cell proliferation, COS-7 cell proliferation, Mad-1(regulatory domain PML type), regulatory domain CY, infectious modulation, cellular tropsim, regulatory domain CY, regulatory domain CY, regulatory domain CY, 3. Microinjection method for non-susceptible cells, COS7, cell membrane, virus, proliferation, virus infection, cell membrane factor, etc. 4. In the past 2 years, 5 cases of PML were identified in Japan, 4 cases of PML and 1 case of Archetype JC were reported. The method of PCR was established.