イムノリポソームを用いたサイトカイン遺伝子導入による糸球体腎炎治療の試み

尝试使用免疫脂质体通过细胞因子基因转移治疗肾小球肾炎

• 批准号: 08877179
• 负责人: 宇都宮 保典
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877179/
• 关键词: マクロファージ; 糸球体腎炎; 遺伝子導入; サイトカイン; リポソーム; 骨髄細胞; ICAM-1

我々は糸球体内に浸潤したマクロファージはメサンギウム細胞の形質変換を誘導し、糸球体障害の増悪・伸展に関与している可能性を報告した。したがって、糸球体内マクロファージの機能を制御することは糸球体腎炎治療において極めて重要と考えられる。そこでマクロファージの機能を抑制するサイトカイン遺伝子を各種ベクターに発現させ、糸球体腎炎の遺伝子治療の試みを行った。1)Immunoliposomeの作成:糸球体腎炎ではICAM-1などのさまざまな細胞接着分子が発現し、マクロファージなど炎症細胞の糸球体内への浸潤に関与していることが報告されている。そこで抗ICAM-1抗体を結合させたリポゾームにIL-10遺伝子を挿入したImmunoliposomeの作成を試みた。しかしながら、その安定性および効率に問題があり、プロモーター変更など現在検討中である。2)アデノウイルスを用いた骨髄細胞への遺伝子導入:ヒトglucocerebrosidase(GC)遺伝子を組換えたアデノウイルスベクターを作成し、マウス骨髄細胞へのGC遺伝子導入を試みた。その結果、GC遺伝子を導入した骨髄細胞はGC遺伝子(PCR法)の発現およびGC活性を有することが確認された。さらにICAM-1のリガンドであるCD11b/CD18が骨髄細胞表面に発現していることをflow cytometerにて検討した。3)実験モデルでの検討:糸球体でのICAMの発現とCD11b/CD18陽性骨髄細胞の浸潤の関連を検討するため、リポポリサッカライド(LPS)誘導糸球体腎炎を作成、GC遺伝子を導入した同種骨髄細胞を尾静脈より投与し糸球体内への外来遺伝子導入が可能か検討した。その結果、GC遺伝子(+)骨髄細胞を投与したマウスではGC遺伝子(-)骨髄細胞投与群に比し糸球体内のGC活性は3倍で、GC遺伝子の存在がPCR法にて確認された。以上の結果より、CD11b/CD18陽性骨髄細胞により糸球体腎炎における炎症の場に特異的に目的の遺伝子を導入し得る可能性が示唆された。現在、遺伝子導入率の向上および安定性を解決するため、レトロウイルスによる系の開発および抗炎症性遺伝子による糸球体腎炎の遺伝子治療について検討をすすめている。

We report on the possibility of cell invasion, cell proliferation and cell death. The function of glomerulonephritis is very important in treating glomerulonephritis. The function of the virus is suppressed, and the virus is detected in various cases. The virus treatment of glomerulonephritis is tried. 1)Immunoliposome preparation: In glomerulonephritis, ICAM-1 expression and cell adhesion molecule expression are associated with the infiltration of inflammatory cells into glomerulonephritis. Anti-ICAM-1 antibody binding to IL-10 gene and preparation of Immunoliposome The stability and efficiency problems are discussed in detail. 2) Gene transfer from bone marrow cells to bone marrow cells: glucoserebrosidase (GC) gene transfer from bone marrow cells to bone marrow cells The results showed that the expression of GC gene and GC activity were confirmed by PCR. CD11b/CD18 was found on the surface of bone marrow cells and was detected by flow cytometer. 3) To investigate the relationship between ICAM expression in human glomerulonephritis and infiltration of CD11b/CD18-positive bone cells, to establish LPS induced glomerulonephritis, to introduce GC gene, to inject allogeneic bone cells into tail vein, and to investigate the possibility of introducing exogenous gene into human glomerulonephritis. The results showed that GC gene (+) was 3-fold more active than GC gene (-) in vivo when GC gene (-) was injected into bone marrow cells, and the presence of GC gene was confirmed by PCR. These results suggest that CD11b/CD18-positive osteoblasts may be able to introduce specific target genes into glomerulonephritis. Now, the increase of gene introduction rate and stability are solved. The development of anti-inflammatory gene system and the treatment of glomerulonephritis are discussed in this paper.

项目成果

宇都宮 保典: "糸球体と間質の相互作用について" 腎と透析. 42・4. 451-457 (1997)

宇都宫康典：“论肾小球和间质的相互作用”《肾脏与透析》42・4（1997）。

Y.UTSUNOMIYA,et al.: "Macrophage-colong stimulating factor (M-CSF) enhances proteinuria and recruitment of macrophages into the glomerulus in experimental murine nephritis." Clin Exp Immunol. 106. 286-296 (1996)

Y.UTSUNOMIYA 等人：“巨噬细胞结肠刺激因子 (M-CSF) 可增强实验性小鼠肾炎中的蛋白尿和巨噬细胞募集到肾小球中的能力。”