転移能を規定する食道癌悪性化因子のクローニング

决定食管癌转移潜能的恶性因子的克隆

• 批准号: 09877241
• 负责人: 赤石 隆
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877241/
• 关键词: 食道癌; 悪性化因子; Magnetic Separation System; 遺伝子クローニング

本研究では食道癌の悪性化(特に転移能や高浸潤性の獲得)に寄与する因子、特に、転移能獲得に伴い、新たな発現または消失する遺伝子をクローニングすることを目的とする。方法は、食道癌の早期リンパ節転移巣や他臓器転移巣より抽出したpoly(A)^+mRNAと正常食道上皮より抽出したpoly(A)^+mRNAの間で、Magnetic Separation Systemを用いてsubtractionし、転移癌組織において新たに発現あるいは消失しているmRNAをクローニングすることによる。現在までに25例の食道癌手術症例で、切除標本より食道癌原発巣および正常食道粘膜を採取した。その内8例で、リンパ節転移巣も採取した。それぞれの組織よりpoly(A)^+RNAを抽出精製した。5例の正常組織及び原発巣のpoly(A)^+RNAをtemplateにBiotinylated Oligo(dT)をprimerとしてcDNAを作成し、このcDNAを癌転移部のpoly(A)^+RNAと反応させた後Streptavidin coated Paramagnetic Particlesに結合しmagnetで吸着分離することによりsubtractionを行った。理論的にはこのsupernatantに、転移能に特異的なpoly(A)^+RNAが存在するはずである。現在、この分離されたsupernatant内のpoly(A)^+RNAをクローニングベクターに組み込み、クローニングを試みている。しかし、そのクローニング効率は、まだ満足出来るまでに至らず、subtractionするpoly(A)^+RNAの比率等について、もう少し検討する必要があると思われる。

The objective of this study is to investigate the factors, characteristics, and acquisition of migration energy associated with the characterization of esophageal cancer (especially migration energy and acquisition of high invasiveness). Methods: In early esophageal cancer, the expression of poly(A)^+ mRNA was extracted from normal esophageal epithelium, and the expression of poly(A)^+ mRNA was reduced by Magnetic Separation System. At present, 25 cases of esophageal cancer were operated on, and the original esophageal cancer was removed and normal esophageal mucosa was taken. 8 cases were found in the same period. A. Polymerase (A)^+RNA extraction In 5 cases, normal tissues and poly(A)^+RNA template for Biotinylated Oligo(dT) primer and cDNA template for poly(A)^+RNA primer and cDNA template for Streptavidin coated Paramagnetic Particles were used to bind to magnet for adsorption and isolation. The theory of supernatant, migration, and specific poly(A)^+RNA exists. Now, the poly(A)^+RNA in the supernatant can be separated from each other. The ratio of poly(A)^+RNA to RNA is the most important factor in determining the ratio of RNA to RNA.