腫瘍拒絶抗原分子による口腔癌の免疫療法の確立

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本年度は、オリゴキャップ法による完全長cDNAライブラリー作成法の条件検討を進め、少量のサンプルからの、作成が可能になった。この改良法を用い、正常舌、及び舌癌について、オリゴキャップ法によるcDNAライブラリーの作製を行った。その結果、両者とも平均鎖長が約2000bpのライブラリーが得られた。独立に得られたクローンは約6x10^5である。それぞれのライブラリーから、各288クローンをランダムに分離し、5'端シークエンスを行ったところ、正常舌よりのcDNAライブラリーについて25クローンの、舌癌よりのcDNAライブラリーについて241クローンの5'端配列が得られた。これらの配列につき、既存のデータベースを用い相同性解析を行ったところ、既知の遺伝子と一致するクローンが正常で251クローン中170、舌癌で241クローン中149であった。また、これらの既知遺伝子のcDNAにつき完全長率を見たところ、正常が92.2%、舌癌で88.4%であった。さらに、それぞれのライブラリーでのクローンの出現頻度を既知のものについて、検討を加えた。それぞれのライブラリーから配列が得られた数が251と241であるので、統計学的に有意な結果ではないが、いくつかの興味有る知見が得られた。1)ケラチン遺伝子は4,6,13のそれぞれ型が両者に発現しているが、癌と正常を比べると6,13型は頻度が変わらないものの、4型は、癌で正常の5分の1に減っていた。このためケラチン遺伝子全体の発現も癌で低くなっている。2)正常で舌で発現の高いLIMタンパク質遺伝子が癌で発現がない。このような、舌癌と正常舌組織との遺伝子発現の差は、今後このライブラリーからのクローンの配列決定を進めることで、さらに多数見いだされてくるものと期待される。