希少放線菌が生産するセラチアプロテアーゼインヒビターの構造と機能に関する研究

稀有放线菌产沙雷氏菌蛋白酶抑制剂的结构与功能研究

• 批准号: 08760107
• 负责人: 尾山 廣
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sojo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760107/
• 关键词: Actinosynnema; SerratiaプロテアーゼInhibitor; PropioxatinA

Serratia piscatorumのセラチアプロテアーゼを対象酵素にインヒビター生産菌の探索を開始し、1,013株の分離菌株より菌対外に熱に安定な低分子性阻害物質を生産するSI-23株を発見した。この生産菌の分類学上の位置を検討し、希少放線菌Actinosynnema属(世界的にも数種しか存在しない希少菌種)と同定した。阻害物質の精製は、培養液18リッターを100℃で15分間の熱処理後、陽イオン交換、陰イオン交換、逆相分配のカラムクロマトグラフィーとHPLC(TSKgel SAX、TSKgel Octadecyl 2PW、ODS10C18、HITACHIgel♯3019)の操作で行った。阻害物質の回収率は11.8%で、白色の凍結乾燥品79.9mgを得た。また、セラチアプロテアーゼ活性に対するID50値は86ngであった。阻害物質はRydon-Smith、ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応に陽性、モリブデン硫酸反応とフェノール硫酸反応に陰性であり、旋光度(28℃、lmg/ml、H_2O)は-90.2℃、融点は85〜86℃の値を示した。FAB-MASSと元素分析により分子量が371、H:7.77%、C:53.52%、N:11.02%の組成値を示した。IRスペクトル分析、NMR分析、アミノ酸組成分析、カルボキシペプチターゼ等の酵素処理の結果、エンケファリナーゼBの阻害物質であるPropioxatinAとBの構造に類似することが分かった。次に、IRスペクトル分析や重水及び重メタノール下でのプロトンNMR及びカーボンNMR分析を行い、Pro-Valに2-プロピルコハク酸のモノヒドロキサム酸が結合した構造が推定され、また、これら標準品とHPLCでの溶出パターンを同一であることから、既知物質であるPropioxatinAであると結論した。PropioxatinAは、ジペプチジルペプチダーゼの阻害剤として発見されているが、Serratiaプロテアーゼを阻害するという報告はない。このインヒビターの作用機作には興味が持たれる。

Serratia piscatorum の セ ラ チ ア プ ロ テ ア ー ゼ を like enzyme に seaborne イ ン ヒ ビ タ ー production bacteria の explore を start し, 1013 strains よ の isolates bacteria り に hot outside seaborne に settle な を low molecular resistance against substance す る SI - 23 strains を 発 see し た. The taxonomic position of the <s:1> genus of production fungi is を検, similar to that of the genus Actinosynnema (several species of に and <s:1> exist in the world, including な and species of rare fungi)と. Resistance against material の refined は, culture 18 リ ッ タ ー を 100 ℃ hot 処 の で 15 points later, Yang イ オ ン exchange, Yin イ オ ン exchange, inverse phase distribution の カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー と HPLC (TSKgel SAX, TSKgel Octadecyl 2PW, ODS10C18, HITACHIgel♯3019) <s:1> operation で line った. The <s:2> recovery rate of the harmful substance is 11.8%で, and the white <s:1> freeze-dried product is 79.9mgを to obtain た. Youdaoplaceholder0, セラチアプロテア ゼ ゼ activity に against するID50 is valued at セラチアプロテア 86ngであった. Resistance against material は Rydon - Smith, ニ ン ヒ ド リ ン anti 応, salt second iron objects against 応 に, モ リ ブ デ ン against sulfate 応 と フ ェ ノ ー ル against sulfate 応 に negative で あ り, optical rotation (28 ℃, LMG/ml, H_2O) は - 90.2 ℃, the melting point は 85 ~ 86 ℃ の numerical を shown し た. Overall MASS と element analysis に よ り が molecular weight 371, H: 7.77%, C: 53.52%, N: 11.02% of の numerical を shown し た. IR ス ペ ク ト ル analysis, NMR analysis, ア ミ ノ acid composition analysis, カ ル ボ キ シ ペ プ チ タ ー ゼ の enzymes such as 処 の results, エ ン ケ フ ァ リ ナ ー ゼ の resistance against B material で あ る PropioxatinA と B に の structure similar す る こ と が points か っ た. に, IR ス ペ ク ト ル や heavy water and heavy び メ タ ノ ー ル under で の プ ロ ト ン NMR and び カ ー ボ ン を い, NMR analysis Pro - Val に 2 - プ ロ ピ ル コ ハ ク acid の モ ノ ヒ ド ロ キ サ ム acid が し た tectonic が presumption さ れ, ま た, こ れ ら standard と HPLC で の dissolution パ タ ー ン を same で あ る こ と か Youdaoplaceholder0, known substance であるPropioxatinAであると conclusion た た. PropioxatinA は, ジ ペ プ チ ジ ル ペ プ チ ダ ー ゼ の resistance against tonic と し て 発 see さ れ て い る が, Serratia プ ロ テ ア ー ゼ を resistance against す る と い う report は な い. The mechanism of action is に に interest is が holding たれる.

项目成果

S.Murao: "Isolation of Propioxatin A from Actinosynnema sp.SI-23 during a Screening for Serratia Piscatorum Metalloproteinase Inhibitors" Biosci.Biotech.Biochem.61. 561-562 (1997)

S.Murao：“在筛选鱼沙雷氏菌金属蛋白酶抑制剂期间从 Actinosynnema sp.SI-23 中分离丙哌沙丁 A”Biosci.Biotech.Biochem.61。