遺伝子操作による鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスの感染性粒子の人工構築

基因操作人工构建鸡传染性法氏囊病病毒感染性颗粒

• 批准号: 08760275
• 负责人: 山口 剛士
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760275/
• 关键词: 伝染性ファブリキウス嚢病; IBDV; ウイルス粒子; 組換えDNA; 人工構築

伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス(IBDV)感染性粒子の人工構築を目的として、IBDVのRNA依存RNAポリメラーゼ(VP1)およびカプシド蛋白(VP2およびVP3)とプロテアーゼ様機能を持つVP4を前駆蛋白質(NH-_2-VP2-VP4-VP3-COOH)として発現する組換え鶏痘ウイルスを構築した。また、cDNAとしてクローニングしたウイルスゲノムからRNAを合成し、合成RNAの細胞内導入による感染性ウイルス粒子の構築について検討した。1.組換え鶏痘ウイルスによるウイルス抗原の発現組換え鶏痘ウイルスから発現された前駆蛋白質は、感染細胞でVP2およびVP3に成熟した。VP1発現組換え鶏痘ウイルスおよび前駆蛋白質発現組換え鶏痘ウイルスを同一細胞に感染させたところ、培養上清中にVP2およびVP3が検出され、それらが30,000rpmの遠心で沈渣として回収された。また、電子顕微鏡による観察で感染細胞質中には、非感染細胞に認められない粒子様構造物の構築が認められた。2.ウイルスゲノムの細胞内導入による感染性ウイルス粒子の構築cDNAとしてクローニングしたIBDVゲノムからプラス鎖およびマイナス鎖RNAをin vitroで合成し、細胞内へ導入した。しかし、ウイルス抗原の発現および粒子の構築は確認できなかった。今回用いたcDNAは、ウイルスゲノムの完全な配列を含んでいなかった。今後、IBDVゲノム両分節の完全長をcDNAとしてクローニングし細胞内へ導入する必要があると考えられた。

The purpose of artificial construction of infectious particles of infectious disease (IBDV) is to construct the RNA-dependent RNA protein (VP1) and the protein (VP2-VP3) of IBDV, and to construct the component protein (NH-_2-VP2-VP4-VP3-COOH) of IBDV. RNA synthesis, RNA synthesis and intracellular introduction of infectious RNA particles 1. Antigen development in infected cells: VP2 and VP3 The VP1 protein expression group was detected in the same cell, and the VP2 protein expression group was detected in the culture supernatant, and the VP3 protein expression group was detected in the same cell at 30,000 rpm. Microscopic examination of infected and non-infected cells reveals the structure of the particles. 2. IBDV DNA is synthesized in vitro and introduced into cells. The discovery of the antigen and the construction of the particle are confirmed. Now we can use the cDNA to complete the sequence. In the future, IBDV must be fully cloned and cloned into cells.