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未知・未培養微生物の検出・モニタリングを可能にする新規視覚的検出技術の開発

开发新的视觉检测技术，能够检测和监测未知和未培养的微生物

基本信息

批准号：
13J09874
负责人：
山口剛士
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J09874/
关键词：
FISH法視覚的検出技術 HCR法原核生物環境微生物 hybridization chain reaction

项目摘要

平成26年度は、平成25年度に開発を行った酵素を用いない新規高感度FISH法を純粋菌株及び環境微生物中のmRNAに適用させた。まず、標的mRNAを選定し、プローブの設計を行った。設計したプローブの適用可能性は、Clone-FISH法を用いて確認した。その結果、設計したプローブは、1塩基ミスマッチを識別できる高い特異性を有していることが明らかとなった。次に、標的mRNAを発現させた純粋菌株を用いて純粋菌株中のmRNAの視覚的検出を試みた。その結果、標的微生物から蛍光が確認できた。さらに、プローブを用いていない系、非標的微生物を用いた系からは蛍光が得られなかった。その結果から、標的微生物から得られた蛍光は、本手法のプローブ由来であると判断した。最後に、平成25年度で微生物群集を明らかにしたバイオリアクター内に生息する標的微生物のmRNAの視覚的検出を試みた。まず、スライド上で実験操作を行ったが、菌体数が少なく、また土壌等の不純物から非特異的な得られた。そこで、フィルター (pore size : 3.0 μm) を用いて不純物を除去し、フィルター (pore size : 0.2 μm) を用いて菌体の回収を行った。その結果、多くの菌体をフィルターに留めることに成功した。そのフィルターに対して本手法を適用させた結果、菌体以外から非特異的な蛍光があるのものの一部の菌体から蛍光が得られた。また、プローブを用いない系、交雑条件が厳しい実験条件では菌体から蛍光が得られなかった。これらの結果から、本研究で開発を行った本手法は微生物中のmRNAの視覚的検出技術として適用できることが明らかとなった。

In FY 2006 and FY 2005, we started to develop enzymes for use in the new high-sensitivity FISH method, which is suitable for pure bacterial strains and mRNA in environmental microorganisms. The target mRNA is selected and the design is performed. There is no applicability of the design, and the Clone-FISH method has been confirmed.そのRESULTS, DESIGN したプローブは, 1塩 Based ミスマッチを Identification できる HIGH い SPECIFICITY していることが明らかとなった. In this case, the target mRNA is present in the pure strain and the target mRNA is detected in the pure strain. The result and the target microorganism are confirmed by light. The さらに, the プローブを use the いていない system, and the non-standard microorganism を uses the いた system からは蛍光が得られなかった. The result is determined, the target microorganism is obtained, and the origin of the method is determined. Finally, in 2006, the microbial clusters in the microorganism cluster were tested in the microorganisms that live in the microorganisms in the microorganisms. The impurities such as まず, スライド, で実験, を行ったが, the number of bacteria, and またTU壌 are all non-specific.そこで、フィルター (pore size : 3.0 μm) を Use いて impurities to remove し、フィルター (pore size : 0.2 μm) を Use いて bacteria to recover を row った.その Result, many くのBacteria をフィルターにstay めることにsuccessful した.そのフィルターに対してThis technique is applicable to the result, except for bacteria. Non-specific な蛍光があるのものの一一の体から蛍光が得られた.また, プローブを Use the いない system, the cross 雑 condition が厳しい実験 condition では bacteria から蛍光がget られなかった. The results of this study are based on the results of this study. This method is suitable for the detection of mRNA in microorganisms.