発生期心筋におけるNa-Ca交換担体の分子構造と機能連関について

心肌发育中Na-Ca交换载体的分子结构和功能关系

• 批准号: 08770037
• 负责人: 長島 雅人
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08770037/
• 关键词: Na-Ca交換担体; 胎児; 心筋; クローニング

当初は、ラット胎児型Na-Ca交換担体遺伝子のクローニングの方法として、胎児心筋(胎生18日目)の遺伝子ライブラリーを作成し、ハイブリダイゼーションによる、クローニングを試みた。しかしながら、胎児心筋において高品質の遺伝子ライブラリーを作成することは、想像以上に難しく、この方法では、結局、目的の遺伝子を単離するまでには、至らなかった。よってRT-PCRを利用したクローニング法に変更。まず、AGPC法を用いて、胎生18日目のラットの心室筋から、mRNAを抽出し、既に報告されている。ラット(成体)のNa-Ca交換担体の遺伝子配列を基にPCRプライマーを作成、第7膜貫通部位と第11膜貫通部位の間に相当する領域にRT-PCRを施行。目的の遺伝子と思われるPCR産物をpGEM Vectorに組み込み、大腸菌に導入することで、クローン化に成功した。得られたDNAのシークエンスをダイデオキシン法を用いて行ったところ、この領域においては、塩基レベルでの遺伝子変異は、いくつか認められるものの、アミノ酸レベルの変異は、認められなかった。現在地の部位についてのシークエンスも同様の方法で、行っている。遺伝子ライブラリーの作成と、そのスクリーニングによるクローニング法に難渋したため、研究の進行は遅れていたが、RT-PCRを利用したクローニング法に変更してからは、比較的順調に進んでおり、今後は、全長のシークエンスを決定し、機能解析へと、進む予定である。補助金により購入した、トランスイルミネーター、エレクトロポレーターは、それぞれDNAの確認、大腸菌への遺伝子導入に汎用しており、本研究の遂行に多大な貢献をしている。

In the first place, the fetal Na-Ca carrier was used in the first place. The method was improved. The fetal heart tendons (the 18th day of birth) were made. In the end, the purpose of this article is to make a conclusion, the end, and so on. The RT-PCR is used to make sure that the law is more accurate. Pregnancy, AGPC method, fetal 18-day pregnancy, mRNA extraction, and report. The substrate of the Na-Ca cross-carrier is made with the base PCR, and the 7th membrane is connected to the 11th membrane. The 11th membrane is connected to the 11th membrane, and it is implemented in the field of RT-PCR. Objective to evaluate the efficacy of PCR in the tissue culture of pGEM Vector, the introduction of bacteria into the bacteria, and the success of the transformation. In this way, you can use the following information: DNA, domain, field, area, field, field At present, the location of the ground is the same as that of the method and line. In the future, the whole system can be resolved, the machine can be analyzed, and the prediction can be made by using the RT-PCR method to improve the performance of the system. In this study, we did some research on how much money was used in this study. We did not know how much money was used in this study. In this study, we did some research on how much money we could use.

项目成果

Yuichi Hattori: "α_1-Adrenoceptor subtype distribution and the conpling to PI hydrolysis in rat and rabbit uentiricular mycoardium" Research Communication in MclecularbPathology and Phoromacology. 93・3. 319-329 (1996)

Yuichi Hattori：“α_1-肾上腺素受体亚型分布及其与大鼠和兔心室心肌中 PI 水解的关系”《分子病理学和病理学研究通讯》93・3（1996）。