内向き整流性カリウムチャネルの単一伝導度を規定する分子構造の解析

决定内向整流钾通道单电导率的分子结构分析

• 批准号: 09770029
• 负责人: 長島 雅人
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770029/
• 关键词: カリウムチャネル; 単一伝導度; 分子構造; 心筋

本年は昨年の研究に引き続き、まずはラットの心筋からKir2.2型の内向き整流性カリウムチャネル遺伝子の全長のクローニングを試みた。 方法はKir2.1型の時と同様に、RT-PCR法を用いて行った。その結果、心筋からクローニングされたKir2.2のシークエンスは、既に報告のあるラットの脳よりクローニングされたものとidenticalであることが判明した。同様にこの遺伝子を挿入したプラスミドDNAをテンプレートとして、in vitroでmRNAを作成し、アフリカツメガエル卵母細胞に発現させ、二本刺電位固定法により全電流を測定したところ、その電流はラット心筋のKir2.1型を発現させた時に得られたものと有意な差異は認められなかった。これらのことから、ラットの心筋にはKir2.1型とKir2.2型のチャネル両方が共存する可能性が考えられた。Kir2.2型の内向き整流性カリウムチャネルの単一伝導度は既に34pSと報告されており、ラット心筋には比較的低い単一伝導度(25pS)と高い単一伝導度(34pS)を持つ2種類の内向き整流性カリウムチャネルが共存することが示唆された。ここで、nativeのラット心筋では、発生過程において、胎生初期は単一伝導の低いチャネルのみであるのに、胎生後期には単一伝導度の高いチャネルが多く出現してくるという過去の報告に着目した。即ち、もし、そうだとすれば、分子生物学的には胎生早期と後期では、Kir2.1型とKir2.2型のチャネルに発現量の違いが見られるのではないかと考えた。 そこで、実験計画を少し変更し、まずはKir2.1型とKir2.2型のmRNAの発現量が胎生時期により異なっているかどうかを、RT-PCR定量法を用いて検討した。予備実験においては、nativeチャネルでの胎生期の変化をmRNAの発現量の変化により説明できるような結果が得られている。今後はこの実験の再現性を確かめるとともに、引き続き単一伝導度と分子構造の関係を追求していきたい。

This year's study was conducted on the development of a new type of semiconductor chip, Kir2.2 type of semiconductor chip and Kir2.2 type of semiconductor chip. Methods Kir2.1 type PCR was used in the same way as Kir2.1 type PCR. The results of the study were as follows: Kir2.2 and Kir2.2 were reported as "identicals." In the same way, the gene expression of DNA was determined by the method of potentiometric fixation. The total current was determined by the method of potentiometric fixation. The Kir2.1 type of current was detected by the method of potentiometric fixation. The possibility of coexistence between Kir2.1 and Kir2.2 types of nuclear weapons is examined. Kir2.2-type inward rectification has a single conductivity of 34pS and a low conductivity of 25pS and a high conductivity of 34pS. This is the first time that a child has been born, and the first time that a child has been born, the second time that a child has been born, the third time that a child has been born, the fourth time that a child has been born. In molecular biology, Kir2.1 type Kir2.2 type Kir2.1 type Kir2.2 type Kir2.1 type Kir2.2 type Kir The expression of Kir2.1 and Kir2.2 mRNA was studied by RT-PCR quantitative method. In order to prepare for the change of birth period, the change of mRNA expression, the explanation of the change of expression, the result of the change of expression, the change of expression. In the future, we will pursue the relationship between conductivity and molecular structure.

项目成果

Naomasa Makita: "A de novo missense mutation of human cardiac Na channel exhjbiting novel molecular mechanisms of long QT symarome" FEBS Letter. 423(1). 5-9 (1998)

Naomasa Makita：“人类心脏 Na 通道的从头错义突变表现出长 QT 对称性的新分子机制”FEBS Letter。

Masato Nagashima: "α_1-Adrenoceptor Subtype Involved in the Positive and Negative Inotropic Response to Phenylephrine in Rat Papillary Mascle" Gen.Pharmac.28(5). 721-725 (1997)

Masato Nagashima：“α_1-肾上腺素受体亚型参与大鼠乳头肌对去氧肾上腺素的正性和负性肌力反应”Gen.Pharmac.28(5) (1997)。

Masaki Sugawara: "Vascular reactivity to EDRF in human umbilical artery at term pregnancy." Can J Physiol Pharmacal. 75(7). 818-824 (1997)

Masaki Sukawara：“足月妊娠时人脐动脉对 EDRF 的血管反应性。”

Naomasa Makita: "A de novo mossense mutation of human cardine Na channel exhibiting novel molecular mechanisms of long QT syndrome" FEBS Letter. 423(1). 5-9 (1998)

Naomasa Makita：“人类 Cardine Na 通道的从头 mossense 突变表现出长 QT 综合征的新分子机制”FEBS Letter。

Yoichi Yamada: "Characeristics of current flactuations originating from activities of inward-rectifier K channels in guimea-pig heart cells." The Journal of Membrane Biology. in press. (1999)

Yoichi Yamada：“源自豚鼠心脏细胞内向整流 K 通道活动的电流波动特征。”