温度感受性ゲルを担体用いた浮遊培養による正常肝細胞の増殖と分化の制御

温敏凝胶为载体悬浮培养控制正常肝细胞的增殖和分化

• 批准号: 08750915
• 负责人: 酒井 康行
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08750915/
• 关键词: ラット肝細胞; 温度感受性ゲル; 増殖; スフェロイド; ファイブロネクチン; ポリイソプロピルアクリルアミド

ポリイソプロピルアクリルアミドを主体とした温度感受性ゲルからなるビーズ担体を開発し,これを利用した浮遊培養によって,正常ラット肝細胞の増殖・分化(スフェロイド形成)の制御を大規模に行う手法を確立することを最終目的として,研究を行った.通常のディッシュを用いる平板培養によって,上記の目的を満たす組成のゲル(イソポリアクリルアミドと特殊なモノマーとの共重合体,(株)興人に合成を依頼)を開発した.最終的に開発したゲルは,37℃のホットプレート上ばかりでなく,室温(25℃)でも固体状態で安定であった.細胞付着性の改善のためには,細胞付着伸展因子であるファイブネクチンによる表面被覆が必要とされた.このゲル上にラット肝細胞を低密度で播種し,上皮成長因子とインシュリンを添加すると,約2日間で約1.5-1.7倍に増殖した.この表面に細胞が増殖したゲルを氷浴に約10分放置することにより,細胞シートは剥離した.このシートを小規模の浮遊培養(旋回培養)を1日間行うことで,肝細胞凝集体(スフェロイド)へと組織化できた.このスフェロイドへの組織化過程では,細胞数の減少は見られなかったので,播種細胞の1.5-1.7倍の細胞数からなるスフェロイドを調製できたことになる.通常,旋回培養では播種細胞のスフェロイドへの組織化率は60%程度であるので,本研究で開発したゲル上での増殖過程を経ることによって,2倍以上の細胞数からなるスフェロイドが得られたことになる(一部をCytotechnology誌に投稿,現在印刷中).その後,同一組成のゲルのビーズ化に関する検討を行ったが,ビーズ状に分散したゲルが浮遊状態で付着成長してしまうという技術的困難に遭遇し,現在さらに検討を進めている.

The development of temperature sensitive carriers for the control of proliferation and differentiation of normal liver cells in suspension culture was carried out in order to establish a large-scale method for the final purpose of research. In general, plate culture is used to record the composition of the target site, and the complex of the target site is developed. The final development temperature is 37 ℃ and the solid state is stable at room temperature (25℃). Cell adhesion is essential for improving cell adhesion. When the cells were seeded at a low density, the growth of epithelial growth factor (EGF) increased by 1.5-1.7 times in about 2 days. The cells on the surface of the cell were grown and separated from each other after about 10 minutes of incubation. Small Scale Plantation Culture (Circular Culture) 1 Day Line, Hepatocyte Aggregates (FSC), Tissue Culture. The number of cells decreased and the number of seeded cells increased by 1.5-1.7 times. In general, the rate of tissue formation of seeded cells in cyclic culture is about 60%. In this study, more than twice the number of cells in cyclic culture was found (one part was submitted to Cytotechnology Journal, now in press). Later, discussions on the integration of the same components were held. The components were scattered and floating, but they encountered technical difficulties in growing up. Now, discussions are underway.

项目成果

Y.Sakai,K.Ichikawa,A.Sakoda M.Suzuki: "Quantitoctive comparison of rat hepatocyte funotions in two improved culture systems with or without rat liver ejithelial cell line" Cytotechnology. 24 (1) (in press). (1997)

Y.Sakai，K.Ichikawa，A.Sakoda M.Suzuki：“在有或没有大鼠肝上皮细胞系的两种改进的培养系统中大鼠肝细胞功能的定量比较”细胞技术。