ファイトアレキシン「カブシジオール」の生合成酵素に関する遺伝子工学

植物抗毒素“卡吸二醇”生物合成酶的基因工程

基本信息

  • 批准号:
    08760044
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.7万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 1997
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ナス科植物の誘導性抗菌物質カプシジオールは、種々の酵素によって生合成される。本研究では、先にHoshinoらとの共同研究で、アラキドン酸処理によりピ-マン中にカプシジオールの生合成が誘導されることと、ピ-マンに特異的に誘導される蛋白質があることを明らかにしている。そこで、ピ-マンにアラキドン酸を処理し、このピ-マンからmRNAを精製し、このmRNAをもとにcDNAライブラリーを作製した。次にこのピ-マンから、分子量59kDaの蛋白質を精製し、プロテアーゼで消化後、SDS-PAGEで分離し、PVDF膜に転写した後、各バンドのアミノ酸配列を決定した。次に得られたアミノ酸配列から、PCR用プライマーを合成した。このプライマーを用いてRT-PCRを行なった結果、この遺伝子の一部をコードするcDNAを得た。このcDNA部分配列をcDNAライブラリーのスクリーニング用のDNAをプローブをとした。次に、DNAプローブを用いてcDNAライブラリーをスクリーニングした。その結果、分子量56439を持つ蛋白質をコードするcDNAが得られた。このアミノ酸配列は、植物のカタラーゼと約90%以上の相同性を示し、この酵素がカタラーゼをコードすることが判った。この遺伝子をプローブとして、ノザンブロッティングを行なった結果、アラキドン酸存在下でこの遺伝子が特異的に誘導されていることが明らかとなった。エリシターで誘導されるカタラーゼがクローン化されたのは、この実験が初めてである。
The <s:1> inducing antibacterial substances of the ナス family of plants カプシジ and <s:1> <s:1> カプシジ カプシジ カプシジ カプシジ カプシジ カプシジ によって によって and the 々 enzyme によって of the species are synthesized into される. This study で は, first に Hoshino ら と で の studies together, ア ラ キ ド ン acid 処 Richard に よ り ピ - マ ン in に カ プ シ ジ オ ー ル の biosynthesis が induced さ れ る こ と と, ピ マ ン に specific に induced さ れ る protein が あ る こ と を Ming ら か に し て い る. そ こ で, ピ マ ン に ア ラ キ ド ン acid を 処 し, こ の ピ - マ ン か ら mRNA を refined し, こ の mRNA を も と に cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. Time に こ の ピ - マ ン か ら, molecular weight 59 kda protein の を refined し, プ ロ テ ア ー ゼ で after digestion, sds-page で separation し, PVDF membrane に planning write し た after, each バ ン ド の ア ミ ノ acid with column を decided し た. Time に have ら れ た ア ミ ノ acid with column か ら, PCR プ ラ イ マ ー を synthetic し た. こ の プ ラ イ マ ー を with い て rt-pcr を line な っ た results, こ の posthumous son 伝 の a を コ ー ド す る cDNA を た. こ の cDNA department assign column を cDNA ラ イ ブ ラ リ ー の ス ク リ ー ニ ン グ with の DNA を プ ロ ー ブ を と し た. Time に, DNA プ ロ ー ブ を with い て cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し た. Youdaoplaceholder0 そ results: molecular weight 56439を holds を protein をコ ドする ドするcDNAが gives られた. こ の ア ミ ノ acid with column は, plant の カ タ ラ ー ゼ と gay を し, about 90% above の phase こ の enzyme が カ タ ラ ー ゼ を コ ー ド す る こ と が convicted っ た. こ の posthumous son 伝 を プ ロ ー ブ と し て, ノ ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ を line な っ た results, ア ラ キ ド ン acid in the presence of で こ の heritage 伝 son が specific に induced さ れ て い る こ と が Ming ら か と な っ た. Youdaoplaceholder0 エリシタ で で induces されるカタラ されるカタラ ゼが ゼが ロ ロ されるカタラ equalization された <s:1> された めてである and <s:1> experiments が initial めてである.

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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专利数量(0)
山田隆志ら: "アラキドン酸で誘導されるピ-マンの5-epi-aristrochene cDNAクローニング" 生化学. 68・7. 653-653 (1996)
Takashi Yamada 等:“花生四烯酸诱导的甜椒 5-epi-aristrochene cDNA 克隆”,生物化学 68・7(1996)。
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