in situハイブリダイゼーション法を利用したカンキツ不定胚形成過程の解析

原位杂交法分析柑橘体细胞胚形成过程

• 批准号: 08760033
• 负责人: 馬場 正
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760033/
• 关键词: 組織形態学; 包理法; 蛍光色素; テクノビット

本研究では、in situハイブリダイゼーション法の植物材料への適用を念頭におき、そのプロトコールの確立を中心に行った。計画の最終目標であったin situのPCRのプロトコールの確立には成功しなかったが、手順中の重要なステップである新しい包理法による切片作製および蛍光色素による染色に成功し、また、PCRの最適条件の検討も行った。得られた結果の概要は以下の通りである。1.組織形態学的手法として、テクノビット樹脂を用いた包理法を確立した。従来用いられてきたパラフィン包理法によって作製したプレパラートと比較して、組織・細胞の保存性に著しく優れていた。また、毒性のある薬品の使用が少なかったうえ、迅速な切片作製が可能であった点、現在最も一般的な樹脂であるスパー樹脂による包理法よりも利用価値が高いものと思われた。2.テクノビットによって作製した切片の染色性を確認するため、DAPIおよびCalcofluor Whiteで染色を行った。その結果両蛍光色素とも十分に利用できることを確認した。3.分子生物学的手法としてDNA増幅装置(PCR)の最適反応条件の検討を行った。PCRの利用経験はわずかであったので、既存のデータのあるカランボラの葉を材料に手法の確認を行った。DNAの抽出法としていくつかの方法を試みたが、その中で、PEGを用いて多糖類を除去した後、SDSとCTABを併用する方法がもっとも効率的に全DNAを抽出できた。RAPD法によってカランボラ12系統の識別が可能かどうかを検討した結果、確実な系統間識別が可能であることがわかり、PCRの反応溶液組成および設定条件の妥当性が確認された。

The purpose of this study is to make sure that the center is established by using the method of plant materials in this study. In situ is used to make sure that the center is set up. Plan to make sure that you are successful, important, important, new, wrapped, sliced, stained with light pigments, stained successfully, stained successfully, PCR stained successfully, stained successfully, and PCR. The following information is summarized in the summary of the results. 1. The technique of physiognomy of the group is to make sure that the fat is confirmed by the method of packing. In this paper, we use the method of information management to make a comparison of the results, and the preservation of tissue cells. The use of a small amount of fat, rapid slicing, and the most general method of fat wrapping is the most common method available now. two。 Please make sure that the sections are stained, and the DAPI sections are stained with Calcofluor White. The results showed that the light pigments were very important to confirm the content of light pigments. 3. Molecular biology techniques such as "DNA" frame device (PCR), "anti-condition", "line". PCR confirms that it is possible to make sure that the material is used in a way that is known as the existing one. After the DNA extraction method was used to determine the total DNA extraction rate, the total DNA extraction rate was determined by the SDS extraction method after the removal of polysaccharides by the DNA extraction method. The RAPD method is used to verify the results of the 12-system system, to make sure that the system is responsible for monitoring the results, and to ensure that the system is responsible for the failure of the system, and that the setting conditions for the composition of the PCR reaction solution are appropriate to confirm the impact.

项目成果

馬場 正: "ウンシュウミカンのベシクル細胞への糖集積に関する研究(第1報)ベシクル細胞の微細構造と輸送経路としてのベシクル柄" 園芸学会雑誌. 65・別冊2. 196-197 (1996)

马场正：“柑橘柑橘囊泡细胞中糖积累的研究（第一次报告）囊泡细胞的超微结构和作为运输途径的囊泡模式”日本园艺学会杂志 65，特刊 2. 196-197（ 1996）

Como Genc: "Effects of hydrostatic pressure on the survival and ultrastructure of Colletotrichum gloeosposides" 東京農業大学農学集報. 41・3. 195-201 (1997)

Como Genc：“静水压力对炭疽病菌存活和超微结构的影响”，东京农业大学农业通报 41・3（1997 年）。