ハイブリッドエピゲノム編集法によるin vitro精子形成技術の開発

利用混合表观基因组编辑方法开发体外精子发生技术

• 批准号: 22KJ2818
• 负责人: 多田羅 麻由
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2818/
• 关键词: 生殖細胞; エピゲノム編集; クロマチン; 精子形成; エピジェネティクス; 分化

本研究では、エピゲノム編集技術を用いた胚性幹細胞から精母細胞への分化誘導法の確立を目的とする。哺乳類の精子形成では、減数分裂期へ移行する際に体細胞型の遺伝子発現プロファイルから精子形成期特有の遺伝子発現プロファイルへと切り替わる。申請者は、マウス精子形成をモデルにこの大規模な遺伝子発現変化が減数分裂移行期の段階的なクロマチン構造変化によってもたらされることを明らかにした。次に、この精子形成の進行に重要なクロマチン動態が生物種間で保存された現象なのかという点に着目した。さらに、種間で共通して精子形成の進行に重要な領域を標的に、人為的に体細胞分裂型から減数分裂型のクロマチン状態に編集することで、in vitroで減数分裂への移行を制御できるのではと考えた。そこで本研究ではまず、抑制型及び活性化型のエピゲノム編集を同時に行う新規のエピゲノム編集技術の確立を進めた。本項目では、ddCas12aを用いたCRISPRoff法による抑制型およびdCas9を用いたCRISPRa法による活性化型のエピゲノム編集を行うためのプラスミドベクターを作製し、CRISPRoff、CRISPRa融合タンパク質の活性をレポーターアッセイにより評価する。現在までに、ddAsCas12aを用いたCRISPRoff法による抑制生のエピゲノム編集を行うためのプラスミドベクターを作製した。作製したCRISPRoffベクターをHEK293FT培養細胞にトランスフェクションし、抗HA抗体を用いたウェスタンブロッティング法によりCRISPRoff融合タンパク質の発現を確認した。

The aim of this study is to establish differentiation induction methods for embryonic stem cells and spermatocytes using the compilation technique. Mammalian spermatogenesis, meiosis transition, somatic type of embryo development, spermatogenesis specific embryo development, cleavage The applicant is responsible for the development of large-scale sperm in the meiotic transition stage. In addition, the development of sperm formation is important for the interspecific preservation of organisms. In addition, interspecific common sperm formation is important in the field of target, artificial somatic cell division type, meiotic type and state of compilation, in vitro, meiotic transition control, etc. In this study, we developed a new method for editing the active, inhibitory and reactive types of DNA. In this project, CRISPRoff method is used in ddCas12a, CRISPRa method is used in ddCas12a method is used in dd Now, ddAsCas12a can be controlled by CRISPRoff method. CRISPRoff fusion protein production was confirmed in HEK293FT cultured cells using the CRISPRoff fusion protein production method.