代謝制御性アミノ酸シグナルによる選択的スプライシングを介した転写後調節機構の解明

阐明代谢调节氨基酸信号选择性剪接介导的转录后调节机制

• 批准号: 22KJ0720
• 负责人: 松本 英里
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0720/
• 关键词: 選択的スプライシング; インスリン受容体

インスリン受容体（IR）には選択的スプライシングによって産生されるIR-AとIR-Bが存在する。本研究では、IR 遺伝子をモデルとして、アミノ酸に応答して選択的スプライシングを制御する因子と、mRNA前駆体配列上にあるスプライシング制御配列の同定を行い、アミノ酸によるシグナルが選択的スプライシング制御を行う機構の解明を目的とした。IR RNA配列上にある制御配列の探索を行った結果、イントロン11の+267～+541塩基の領域が、アミノ酸欠乏時のIR-A型優位への変化に必要であることがわかった。予測プログラムを用いて結合する因子の候補を探索したところ、PTBP1の結合配列が存在することが明らかになった。そこでPTBP1をsiRNAによってノックダウンし、内在性IRの選択的スプライシングパターンを解析したところ、PTBP1はIRのIR-A型のスプライシングを誘導することが明らかとなった。さらに、PTBP1はオルニチンに特異的に結合するタンパク質であることをわれわれは見出している。以上のことから、オルニチンがPTBP1に結合することでｍRNA前駆体への結合が阻害され、選択的スプライシングの調節ができなくなる結果、IR-B型優位へと変化することが示唆された。アミノ酸欠乏・オルニチン添加培地で培養したラット肝癌由来H4IIE細胞におけるIRの選択的スプライシングの経時的変化を解析したところ、アミノ酸欠乏によってスプライシングパターンが変化する時間と、アミノ酸欠乏状態の細胞へのオルニチン添加によるスプライシングが変化する時間には差が見られた。この理由として、オルニチンが細胞に取り込まれるのに時間がかかる場合と、オルニチンが直接、PTBP1などのオルニチン結合タンパク質を介してIRのスプライシングを制御するのではなく、その代謝産物がIRのスプライシングを制御する場合とが考えられた。

The recipient (IR) selected for the IR-An IR-B has been selected for this purpose. In this study, the IR system was used in this study. In this study, the selection of the control factor, the control factor, the configuration of the mRNA system and the selection of the system in the front of the mRNA were used in this study. On the IR RNA configuration column, it is necessary to explore the results of the configuration column to explore the results of the row, the number of fields in which the IR- A bit is deficient, the number of users in the field, and the number of users in the field. Please use this combination of factors to explore the availability of information and PTBP1 in the configuration column. This is not true in the case of PTBP1, siRNA, IR-A, internal IR, IR-A, IR, and so on. The combination of the information, PTBP1, and special information is not available. Please check it out. The results show that the results of the above experiments, the combination of the PTBP1 and the mRNA front body are combined with the blocking test, the selected one, and the IR- B position. The reason for the formation of liver cancer in H4IIE cells is to analyze the chemical properties of the selected cells of the IR. There is a lack of acid in the state, and there is a lack of acid in the state. This is not true. This is not true. The reason for this is that the reason is different, that is, the reason is that the time of the purchase is closed, that the PTBP1 is used directly, and that the IR is used directly, and that the system is used to control the quality of the product, and that the product is used as a substitute. The system controls the performance of the system.