生理活性ペプチドプロセシングブロテアーゼ・PACE4アイソフォームの発現調節

生物活性肽加工蛋白酶 PACE4 亚型表达的调节

• 批准号: 08680690
• 负责人: 辻 明彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680690/
• 关键词: ペプチドホルモン; ケキシン; PACE4; プロセシング; アイソフォーム; 選択的スプライシング; 遺伝子; クローニング

PACE4は,Kexin様プロテアーゼファミリーに属するCa^<2+>依存性セリンプロテアーゼで,生理活性ペプチドや血清タンパク,レセプターのプロセシングに重要な働きを有する.PACE4タンパクはN末よりシグナルペプチド,プロペプチド,サイライシン様触媒ドメイン,ホモBドメイン,システインリッチドメインから構成されている.私共は,PACE4には3′側の異なるアイソフォームが全部で7種類存在することをcDNAクローニングにより証明し,各アイソフォームの機能,細胞特異発現について研究を進めてきた.本研究では,PACE4遺伝子をヒトゲノムライブラリーよりクローニングし,その構造解析より,アイソフォームの生成機構,発現調節機序を明らかにしようとした.またアイソフォーム(A-I,A-II,C,E-I,E-II)に関しては,その生合成,細胞内局在,共発現実験による基質特異性の同定について研究を行った.その結果,ヒトPACE4遺伝子は25ケのエクソンから成る長さ300kb以上の複雑な遺伝子であることが判明し,選択的スプライシングによるアイソフォームの生成機構が明らかとなった.遺伝子の5′-上流域にはTATA,CAT boxは認められなかったが,転写因子SP1,AP1,AP2の結合部位が存在した.また6回連続した特異な塩基配列が存在し,PACE4の発現調節に重要な役割を持つと推定された.培養細胞の過剰発現系を用い各アイソフォームの細胞内動態やその局在性に差があることも判明した.PACE4A,4Eはいずれもトランスゴルジ領域に局在するが,PACE4Aは一部細胞外へ分泌されるのに対し,4Eは全んど分泌しなかった.PACE4Cは小胞体に局在した.これらの成果は,論文発表以外に,アジア・オセアニア生化学・分子生物学会,日本生化学大会において発表された.

PACE4 is a member of the Kexin family, a bio-active, selective, and selective species. PACE4 is a member of the Kexin family, a bio-active, selective, and selective species. PACE4 is a member of the PACE4 family. In addition,PACE4 has a 3′-side variant, and all 7 species exist. The cDNA library has been used to prove the function of each species, and the research on cell-specific development has been carried out. In this study, the PACE4 gene was analyzed by structural analysis, and the mechanism of generation and regulation was discovered. The study of matrix specificity and identity in the synthesis, intracellular localization, and co-development of matrix groups (A-I,A-II,C,E-I,E-II) was carried out. As a result, the PACE4 gene was 25 kb long and over 300kb long, and it was determined that the selected gene was generated by the gene generation mechanism. The binding sites of SP1, AP1 and AP2 in the 5′-upper watershed of the seed are not found in the CAT box. The 6-loop linkage is unique, and the occurrence and regulation of PACE4 is important. The intracellular dynamics of cultured cells were determined by using the following methods: PACE 4A, PACE 4E,PACE4A,PACE 4E, PACE 4C. The results of this research were published in the Journal of Biochemistry and Molecular Biology, Japan Biochemistry Conference.

项目成果

Kenji,Mori et al: "A Novel Human PACE4 Isoform,PACE4E is an Active Processing Protease containing a Hydrophobic cluter at the Carboxy Terminus." J.Biochem(Tokyo). 121(5)(in press). (1997)

Kenji, Mori 等人：“一种新型人类 PACE4 同工型，PACE4E 是一种活性加工蛋白酶，在羧基末端含有疏水性杂乱物。”