内皮細胞の流れ刺激受容の分子機構におけるPECAM-1のチロシンリン酸化の研究

PECAM-1酪氨酸磷酸化在内皮细胞流刺激接收分子机制中的研究

• 批准号: 08680782
• 负责人: 増田 道隆
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680782/
• 关键词: 血管内皮細胞; 流れ; PECAM-1; SH-PTP2; SHP2; チロシンリン酸化

我々は細胞接着分子PECAM-1が、流れや浸透圧刺激などの機械刺激により急速にチロシンリン酸化されることを明らかにした。本研究では、PECAM-1のチロシンリン酸化の細胞内情報伝達に果たす役割の解明をめざして、チロシンリン酸化されたPECAM-1に特異的に結合するタンパク分子を探索した。GST融合タンパク質として発現させたPECAM-1の細胞質ドメインを用いて、PECAM-1がどのようなタンパク質と相互作用するのかをFar Western blottingで検討した。その結果、分子量65kDaのバンドにチロシンリン酸化特異的な結合がみられた。このタンパク質を内皮細胞の大規模培養より精製し、部分アミノ酸配列からタンパク質チロシン脱リン酸化酵素の一種SHP2(SH-PTP2,PTP1D,PTP2C,Syp)であることを明らかにした。共免疫沈実験により、実際に内皮細胞内でこの結合が起こっており、PECAM-1が内皮細胞におけるSHP2の主要な結合分子であることが示された。この結合は機械刺激依存的に増加し、またSHP2の2つのSH2ドメインを持つGST融合タンパク質とPECAM-1の結合も刺激依存的に増大することから、PECAM-1/SHP2結合はPECAM-1のチロシンリン酸化を介するものであった。本研究はSHP2が機械刺激の情報伝達に関与していることを初めて示したものである。細胞内情報伝達において、SHP2はレセプター型チロシンキナーゼのすぐ下流でRasの活性化に働いている。内皮細胞では、流れなどの機械刺激によるMAPキナーゼの活性化が最近報告されている。MAPキナーゼ活性化は、遺伝子発現の変化など、"遅い"流れ応答で主要な役割を果たしているものとされ、少なくともその一部はPECAM-1/SHP2/Rasを介しているものと考えられる。本研究により、内皮細胞の機械刺激応答におけるPECAM-1チロシンリン酸化は細胞内情報伝達において重要な意義を持つことが示唆された。

Our cells are connected to the molecule PECAM-1, and the flow is soaked in pressure and stimulates the mechanical stimulation of the cells. In this study, the results of PECAM-1 acidification and intracellular intelligence were revealed.して, チロシンリン acidified されたPECAM-1 is a specific に-binding するタンパク molecule and is explored. GST fusion タンパク性として発appears させたPECAM-1のcytoplasmic ドメインをUse いて, PECAM-1 がどのようなタンパクquality とinteraction するのかをFar Western blotting method. As a result, the のバンドにチロシンリン acidification specific がみられた with a molecular weight of 65kDa. Large-scale culture of このタンパをendothelial cells and purification, partial アミノacid preparation and からタンパクquality チロシンde-リン acid SHP2 (SH-PTP2, PTP1D, PTP2C, Syp), a kind of chemical enzyme, is a kind of chemical enzyme. Co-immunoprecipitation, 実験により, 実记に endothelial cell binding, PECA The main binding molecule of M-1 endothelial cells is SHP2.このcombinationはMechanical stimulation-dependent にincreaseし、またSHP2の2つのSH2ドメインをholdつGST fusion タンパクqualityとPECAM-1のcombination Stimulus-dependent stimulation, PECAM-1/SHP2 binding, PECAM-1 acidification, and acidification. This study is based on the mechanical stimulation of SHP2 and the detection of mechanical stimulation. Intracellular information 伝达において, SHP2 はレセプター-type チロシンキナーゼのすぐ Downstream でRas のactivation に働いている. Endothelial cell では, flow れなどの mechanical stimulation によるMAP キナーゼのactivation が recently reported されている. MAPキナーゼactivationは、缝子発 appearの変化など、"恅い"流れ応AnswerでmainなServantcutを Fruitたしているものとされ、小なくともその一一はPECAM-1/SHP2/Rasを Introduction しているものと卡えられる. In this study, the mechanical stimulation of endothelial cells and PECAM-1 acidification of endothelial cells are important and significant.

项目成果

Osawa,M.: "Tyrosine phosphorylation of platelet endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1,CD31) in mechanically stimulated vascular endothelial cells." Eur.J.Cell Biol.72・3. 229-237 (1997)

Osawa, M.：“机械刺激的血管内皮细胞中血小板内皮细胞粘附分子 1 (PECAM-1,CD31) 的酪氨酸磷酸化。”Eur.J.Cell Biol.72·3 (1997)。

増田道隆: "培養細胞に流れ刺激を与える装置の原理と実際" 組織培養. 22・10. 408-412 (1996)

Michitaka Masuda：“向培养细胞提供流动刺激的装置的原理和实践”组织培养22・10（1996）。

Katoh,K.: "Mutually exclusive distribution of the focal adhesion associated proteins and the erythrocyte membrane skeleton proteins in the human fibroblast plasma membrane undercoat." Cell Struct.Func.21・1. 27-39 (1996)

Katoh, K.：“人成纤维细胞膜质底涂层中粘着斑相关蛋白和红细胞膜骨架蛋白的相互排斥分布。Cell Struct.Func.21·1（1996）”