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Establishment of efficient virus isolation by protease expression cells

通过蛋白酶表达细胞建立有效的病毒分离

基本信息

批准号：
22KJ0023
负责人：
岸本麻衣
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2023)Hokkaido University (2021-2022)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、プロテアーゼ依存性ウイルスの高効率な分離法を開発し、野生動物検体から新規ウイルスを分離し、その生物学的性状を解析することを目的とする。これまで、宿主プロテアーゼを発現する細胞を用いたウイルス分離と次世代シークエンサーによる網羅的ウイルス検出を組み合わせたスクリーニング系を構築し、ザンビアで採取された野生動物合計約400検体からウイルス分離を試みた。その結果、脳心筋炎ウイルス（EMCV）およびロタウイルスA（RVA）を分離した。本年度は、コウモリおよび齧歯類動物から分離されたRVAの性状解析を実施した。近年、一部の分節でコウモリや齧歯類由来のRVAと類似した遺伝子型をもつRVAがヒトから検出されており、コウモリと齧歯類動物のRVAの人獣間伝播の可能性が懸念されている。しかし、これらの報告はゲノム解析にとどまるものが多く、ウイルスの分離及び性状解析はほとんど実施されていない。まず、全分節の遺伝子配列情報を決定し、遺伝子再集合の評価、および系統学的解析を実施した。その結果、コウモリ由来RVA 16-06株の遺伝子型は、ケニアの同種コウモリから検出された BATp39株と同一であったが、マストミス由来RVA MpR12株は、既知の遺伝子型と配列類似性が低く、全分節が新規の遺伝子型として登録された。さらに、MpR12株は、系統学的に他の齧歯類由来RVAよりもコウモリ由来RVAに近く、特徴的な進化系統を有することが示された。続いて、RVAが細胞侵入する際の接着因子である細胞表面糖鎖とRVAの結合性を調べた結果、16-06株は細胞表面のシアル酸と結合して細胞内に侵入する一方、MpR12株はシアル酸とは結合しないことが明らかになった。細胞表面糖鎖への結合性が宿主特異性に関連するという報告もあることから、今後分離したRVAの宿主域および病原性に関する解析を進める。

The purpose of this study is to develop a high efficiency isolation method for wildlife species and to analyze their biological characteristics. The host cells were isolated from the next generation and the wild animals were isolated from the next generation. The result is that the heart muscle cells (EMCV) are separated from the heart muscle cells (RVA). This year, the analysis of RVA traits was carried out in different species. In recent years, a number of segments have been identified and the possibility of human-to-human transmission of RVA in rodents has been raised. This report is intended to be used for analysis, separation and characterization. To determine the allocation information of all sub-clusters, to evaluate the sub-clusters, and to implement the analysis of systematics RVA 16-06 strain has the same genetic type as RVA MpR12 strain. The genetic similarity of RVA MpR12 strain is low and the genetic similarity of RVA MpR 16 - 06 strain is low. MpR12 strains are shown to be related to the phylogenetic origin of RVA and to the evolution of RVA characteristics. The results showed that RVA could bind to cell surface carbohydrate and RVA could bind to cell surface carbohydrate. The association between cell surface glycoproteins and host specificity is reported, and the host domain of RVA and pathogenicity are analyzed in the future.