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急性腎不全の回復過程におけるユビキチン依存性蛋白質分解系の意義

泛素依赖性蛋白降解系统在急性肾功能衰竭恢复过程中的意义

基本信息

批准号：
09671179
负责人：
柴崎敏昭
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoritsu University of Pharmacy (1998)Jikei University School of Medicine (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ユビキチン-プロテアソームシステムは細胞内の蛋白分解を制御することで、細胞周期、シグナル伝達ストレス応答など様々な現象に関る。本研究は、薬剤・重金属による腎尿細管細胞の傷害に対して同システムが果たす役割、その意義を解明する目的で行った。本年度は、有用な抗癌剤ながら腎毒性が問題となるシスプラチンの検討を行った。なお、昨年度用いたPtKl細胞は有袋類由来で各種抗体・核酸プローブとの反応性に種特異性の問題を生じた。そこで、ブタの株化近位尿細管細胞LLC-PKlによる細胞傷害実験系を実験に供した。シスプラチンはLLC-PKl細胞の増殖を阻害し、そのIC_<10>は約3μMと見積もられた。この条件下で細胞内ユビキチン量の変化を検討した結果、分解シグナル“マルチュビキチン鎖"はシスプラチン添加後経時的に増加し、対象群と添加後96時間群に統計学的有意差を認めた(p<0.05)。また、プロテアソーム阻害剤でユビキチン化蛋白の分解を停止させてもマルチュビキチン鎖は経時的に増加した。そこでシスプラチンとプロテアソーム阻害剤を併用したところ、そのレベルは相加的に上昇した。以上の結果から、シスプラチンはユビキチン化反応を促進し、これによって標的蛋白の分解が亢進すると考えられる。現在、この背景として、シスプラチンが細胞内蛋白を変性させる可能性を想定しているが、今後の課題である。なお、シスプラチン処理は、細胞内遊離型ユビキチンレベルも有意に増加させた。おそらく、同薬剤はユビキチン遺伝子発現のトリガーにもなり得ると推定している。以上、シスプラチンによる細胞傷害の際に、ユビキチン-プ口テアソームシステムが明確に応答することを見出した。これを昨年度のゲンタマイシンおよびカドミウムの結果と比較すると、カドミウムの場合に類似する。今後、傷害過程でユビキチン化される蛋白質を同定し、その分解が担う役割を追求する。

The cell cycle is related to the regulation of protein breakdown in cells, cell cycle, cell cycle and cell cycle. The purpose of this study is to clarify the effects of heavy metals on renal tubule cells. This year, we will discuss the problem of nephrotoxicity with anticancer agents. PtKl cells have a variety of antibodies, nucleic acids, and anti-species specificity problems. The cell injury system was established by the LLC-PKl method. The proliferation of LLC-PKl cells <10>was inhibited by the presence of a 3μM inhibitor. Under these conditions, the change of intracellular traffic volume was investigated. The results showed that the decomposition of traffic volume increased after the addition of traffic volume, and the statistical intentional difference between the target group and 96 time group after the addition of traffic volume was recognized (p<0.05). In addition, the protein decomposition of the protein in the protein chain was also increased. The number of people in the United States who are not in the United States is increasing. The above results show that the protein decomposition of the target protein is promoted and the protein decomposition is promoted. Now, the background, the possibility of intracellular protein change, the future of the topic In addition, the intracellular free form of the protein was intentionally increased. In addition to the above, it is also possible to determine whether or not the information is available to the public. The above mentioned problems can be clearly explained when cell injury occurs. The results of this study are similar to those of the previous study. In the future, the process of injury will be divided into three parts: protein synchronization, protein decomposition and protein separation.