生体蛍光観察法による肺血管透過性亢進機序の解析

生物荧光观察法分析肺血管通透性增加的机制

• 批准号: 09671359
• 负责人: 北村 道彦
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09671359/
• 关键词: 肺障害; 好中球; 過酸化水素; 血管内皮細胞; 生体肺

血管内皮細胞に発現している接着分子lCAM‐1と好中球に発現している接着分子Mac‐1が結合することにより好中球から過酸化水素が産生される.そしてこの過酸化水素がsecond messangerとして働き血管内皮細胞内のcalcium上昇などの細胞内シグナルを活性化させ,さらにこの反応がmyosin light chain kinaseを活性化させることにより細胞骨格を構成するmyosinとactinのinteractionによるactinの構造変化(G-actinからF-actinへの変化)を引き起こし,血管透過性が亢進して肺水腫が起きるという一連の反応が実際に生体で起きているということを明らかするということを目的としてこの研究を進めた.そして平成9年度は以下の成果を得た.ラットにエンドトキシン(5mg/k9)をしてARDSモデルを作製した.そしてdichlorofluorescein diacetate(DCFH‐DA)を投与の後,生体肺を落射型蛍光顕微鏡で過酸化水素産生を可視化し,過酸化水素のを画像として観察・解析した.またセリウムを利用した電顕法により電頭上で過酸化水素の産生の局在を明らかにした.その結果ラツトARDSモデルでは肺毛細血管に粘着した好中球から過酸化水素が産生され,血管内皮細胞に拡散することが明らかとなった.またこのモデルにlCAM‐1の中和抗体である1A29を投与すると好中球の肺毛細血管への集積は抑制されないが,過酸化水素の産生がほぼ100%抑制されることが明らかとなった.以上の結果よりラットARDSモデルでは肺毛細血管に粘着した好中球から過酸化水素が産生され,その過酸化水素が肺毛細血管内皮細胞に拡散することが明らかとなった.またこの好中球の過酸化水素産生には血管内皮細胞に発現する接着分子lCAM‐1が関与することが明らかとなった.

Vascular endothelial cells produce the adhesion molecule lCAM-1 and the adhesion molecule Mac-1, and the adhesion molecule Mac-1 binds to the adhesion molecule. The second messenger of this hyperacidified hormone is the increase of calcium in vascular endothelial cells, the activation of intracellular enzymes, the activation of myosin light chain kinase, and the structural transformation of actin in the interaction between myosin and actin in cellular bone structure.(G-actin, F-actin, etc.), vascular permeability, pulmonary edema, pulmonary edema. The following achievements were achieved in the ninth year of Heisei. The main purpose of this study is to control the development of ARDS and its related diseases. After DCFH‐DA was injected, the production of peracidified water was visualized under an epi-luminescent microscope, and the characterization of peracidified water was observed and analyzed. Also, the use of the electrostatic method in this system makes it clear how peracidified water is produced on the electrode. As a result, pulmonary capillary adhesion and hyperacidity are produced, and vascular endothelial cells are dispersed. 1A-29, a neutralizing antibody to CAM-1, inhibits the accumulation of hyperacidified water in pulmonary capillaries and inhibits the production of hyperacidified water by 100%. The above results show that hyperacidified water is produced in pulmonary capillary endothelial cells, and hyperacidified water is dispersed in pulmonary capillary endothelial cells. The production of hyperacidified hormones in the brain and vascular endothelial cells is associated with the development of the molecule lCAM-1.