筋萎縮性側索硬化症の脊髄前角に蓄積するヘパラン硫酸様物質の精製及び同定

肌萎缩侧索硬化症患者脊髓前角积聚的硫酸乙酰肝素样物质的纯化与鉴定

• 批准号: 09670637
• 负责人: 加藤 丈夫
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09670637/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症; Hep SS-I; 脊髄; スフェロイド; ヘパラン硫酸; プロテオグリカン; ニューロポリペプチド・h3; 運動ニューロン疾患; HepSS-1; IDPN

HepSS-1が認識する物質はALSの病態に関与している可能性がある。したがって、本研究では、HepSS-1が認識する物質をヒト脊髄から分離・精製し同定する。非神経疾患症例の脊髄ホモジネートを超遠心し、上清(TBS 上清)と沈渣を得た。沈渣は8M尿素を含むTBSを用いてホモジナイズし、超遠心後、上清を回収した(8M尿素上清)。 HepSS-1を一次抗体とするWestern blottingを行い、 TBS上清画分に約24kDa、8M尿素上清画分に約18kDaの陽性バンドを認めた。SDA―PAGE、 Western blotting、陰イオン交換カラムクロマトグラフィーおよび二次元電気泳動法を用い精製を進め、以下の結果を得た。1.TBS上清画分中の24kDa蛋白質のN末端アミノ酸配列はPVDLSKWSGPLSLQEVDEQPQHであった。これはneuropolypeptideh3のN末端アミノ酸配列と完全に一致した。2.特大二次元電気泳動装置を自作し、8M尿素上清画分中の18kDa蛋白質を単一スポットにまで分離・精製したがN末端はプロックされていた。3.18kDa蛋白質のN末端をプロックしている基は、アセチルセリン、アセチルトレオエンではなく、また、ホルミル基でもなかった。4.18kDa蛋白質はリシルエンドペプチダーゼによる消化に対して抵抗性を示した。

HepSS-1 is known to be associated with ALS pathology and the possibility of ALS pathology. In this study, HepSS-1 was used to identify substances that could be isolated and purified. Non-neurologic disorders include: hyperthermia, TBS, and sediment. The sediment is mixed with 8M pajamas and TBS, and the supernatant is recovered after ultra-telecentric processing (8M pajamas supernatant). HepSS-1 is a primary antibody to Western blotting, TBS supernatant is about 24kDa, and 8M urea supernatant is about 18kDa. SDA-PAGE, Western blotting, anion exchange chromatography, and two-dimensional electrophoresis were used to refine the results. 1. The N-terminal amino acid sequence of the 24kDa protein in TBS supernatant is PVDLSKWSGPLQEVDEQPQH. The N-terminal amino acid sequence of the neuropeptide 3 is completely identical. 2. The 18kDa protein in the supernatant of 8M urea was isolated and purified by a very large quadratic electrokinetic device. 3. The N-terminal of 18kDa protein is divided into two groups: one group, the other group, the other group. 4.18 kDa protein is resistant to digestion.