Oct4陽性肺癌幹細胞マウスモデルの樹立と癌幹細胞を根絶する革新的治療法の開発

Oct4阳性肺癌干细胞小鼠模型的建立及根除癌症干细胞的创新疗法的开发

• 批准号: 22K19529
• 负责人: 大橋 圭明
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19529/
• 关键词: 肺癌; 癌幹細胞; Oct４; 2型肺胞上皮細胞; EGFR変異; 腫瘍微小環境; Oct4

進行期肺癌は癌死亡数が第1位の難治癌の代表である。その中で、上皮成長因子受容体（EGFR）遺伝子変異を有する肺癌（EGFR肺癌）は、日本人の非喫煙者に発生する肺腺癌の半数以上を占める非常に重要な疾患であり、根治的な効果をもたらす新規治療戦略の開発が強く求められている。多分化能、多剤薬剤耐性能をもつ癌幹細胞（cancer stem cells：CSCs)が根治の障壁として重要な役割を担っていると考えられてるが、病態は未解明である。また、CSCsのin vivoモデルは確立しておらず、CSCsと腫瘍微小環境（tumor microenvironment: TME）の間質細胞、免疫細胞との相互関係についても未解明である。Egfr変異をマウス2型肺胞上皮（AT2）細胞へ特異的に発現させた肺癌マウスモデル（C57BL/6 Egfrex19del）、及び皮下移植により継代可能なシンジェニックマウスモデルを樹立した。さらに癌幹細胞を分離するためのマーカーとして、幹細胞のマスター転写因子の一つであるOct4に着目し、Oct4発現をGFPで標識した遺伝子改変マウス(RBRC00821)を理化学研究所バイオリソースセンターから供与を受けた(以下C57BL/6 Oct4-GFPと標記)。岡山大学動物資源部門においてこれらマウスを交配し、新たに作製したマウス（C57BL/6 Egfr/Oct4-GFP）の肺腫瘍から、皮下移植にて継代できるシンジェニックマウスを作製した。GFPの自家蛍光を処理方法の確立に時間を要したが、GFPの陽性、陰性にて細胞ソーティング、植え付け、in vivoでの薬剤感受性試験を行うことができ、再現性の確認中である。

晚期肺癌是顽固性癌症的代表，癌症死亡人数最多。其中，携带表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的肺癌（EGFR肺癌）是极为重要的疾病，占日本非吸烟者中发生的肺腺癌的一半以上，并且有很强的需要开发出提供自由作用的新型治疗策略。具有多能和多药耐药性的癌症干细胞（CSC）被认为是治愈障碍的重要作用，但病理尚不清楚。此外，尚未建立CSC的体内模型，CSC与肿瘤微环境（TME）的间质细胞与免疫细胞之间的相互作用尚未澄清。肺癌的小鼠模型（C57BL/6 EGFREX19DEL），其中EGFR突变在小鼠2型肺泡上皮（AT2）细胞中特异性表达，并建立了可以通过皮下植入的合成小鼠模型。此外，作为隔离癌症细胞的标志物，我们集中在Oct4上，Oct4是干细胞的主要转录因子之一，并以GFP标记的OCT4表达接收了基因改性小鼠（RBRC00821）（以下称为C57BL/6 Oct4 oct4 oct4 oct4 oct4 oct4 oct4 oct4 oct4 oct4 gfp）。这些小鼠在冈山大学的动物资源部门越过，以产生合成小鼠，这些小鼠可以通过皮下植入新生产的小鼠的肺肿瘤（C57BL/6 EGFR/OCT4-GFP）传递。它花了一些时间来建立一种治疗GFP自动荧光的方法，但是可以对阳性和负GFP进行细胞分选，植入和体内药物敏感性测试，并确认可重复性。

项目成果

EGFR阻害が誘導するEgfr肺癌に対する抗腫瘍免疫を逐次的VEGFR-2/PD-1阻害が増強する

序贯 VEGFR-2/PD-1 抑制增强 EGFR 抑制诱导的针对 Egfr 肺癌的抗肿瘤免疫

• 发表时间: 2022
• 作者: Higo H;Ohashi K;Makimoto G;Nishii K;Kudo K;Kayatani H;Watanabe H;Kano H;Ninomiya K;Hotta K;Maeda Y;Kiura K.;中須賀崇匡，大橋圭明，西井和也，平生敦子，大川祥，髙田健二，西村淳，栗林忠弘，安東千裕， 西達也，森田絢子，槇本剛，二宮貴一朗，藤井昌学，市原英基，堀田勝幸，田端雅弘，前田嘉信，木浦勝行;西井和也，大橋圭明，冨田秀太，中須賀崇匡，平生敦子，大川祥， 西村淳，安東千裕，槇本剛，二宮貴一朗，加藤有加，久保寿夫， 市原英基，堀田勝幸，田端雅弘，豊岡伸一，鵜殿平一郎，前田嘉信，木浦勝行
• 通讯作者: 西井和也，大橋圭明，冨田秀太，中須賀崇匡，平生敦子，大川祥， 西村淳，安東千裕，槇本剛，二宮貴一朗，加藤有加，久保寿夫， 市原英基，堀田勝幸，田端雅弘，豊岡伸一，鵜殿平一郎，前田嘉信，木浦勝行