経静脈投与が可能な虚血性心疾患に対するエクソソーム治療法の開発

本年度は、血管新生能を持つmicroRNAを細胞外小胞に内包させるために、293T細胞にmicroRNAを導入することで、293T細胞が分泌する細胞外小胞に導入したmicroRNAが内包されていることを確認すること、そして、その細胞外小胞の特性を解析した。293T細胞にmicroRNAを導入し、その293T細胞におけるmicroRNAの発現をqPCRで解析することで、microRNAが293T細胞に導入出来たことを確認した。そして、その293T細胞の培養液を回収し、その培養液から細胞外小胞を単離し、その細胞外小胞からmicroRNAを抽出後に、qPCR解析を行ったところ、コントロールと比較して、目的のmicroRNAの内包量が非常に高い値で検出されたことから、血管新生能を持つmicroRNAが内包された細胞外小胞を作製することが出来たと判断した。その血管新生能microRNAを内包した細胞外小胞を、マウス重症下肢虚血モデルの大腿部に移植して2日後に、大腿部の組織を回収してtotal RNAを抽出し、血管新生に関与する遺伝子に対するqPCR解析を行ったところ、解析をした6つの血管新生に関与する遺伝子の発現は、コントロールと比較して、有意に高い値を示した。

本年度は、血管新生能を持つmicroRNAを細胞外小胞に内包させるために、293T細胞にmicroRNAを導入することで、293T細胞が分泌する細胞外小胞に導入したmicroRNAが内包されていることを確認すること、そして、その細胞外小胞の特性を解析した。293T細胞にmicroRNAを導入し、その293T細胞におけるmicroRNAの発現をqPCRで解析することで、microRNAが293T細胞に導入出来たことを確認した。そして、その293T細胞の培養液を回収し、その培養液から細胞外小胞を単離し、その細胞外小胞からmicroRNAを抽出後に、qPCR解析を行ったところ、コントロールと比較して、目的のmicroRNAの内包量が非常に高い値で検出されたことから、血管新生能を持つmicroRNAが内包された細胞外小胞を作製することが出来たと判断した。その血管新生能microRNAを内包した細胞外小胞を、マウス重症下肢虚血モデルの大腿部に移植して2日後に、大腿部の組織を回収してtotal RNAを抽出し、血管新生に関与する遺伝子に対するqPCR解析を行ったところ、解析をした6つの血管新生に関与する遺伝子の発現は、コントロールと比較して、有意に高い値を示した。