集積回路への細胞固定による生体反応の制御と検出

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本研究では、①細胞の作製、②集積回路の作製、③細胞の固定法の確立、④細胞―集積回路結合体の機能評価、の４つを行う。本年度は①③を中心に行った。発信および受信する細胞の構築：Wangらによって開発された光照射（460 nm）で転写が活性化される人工転写調節因子（Nat Methods 9, 266-269, 2012）を利用し、転写調節因子が結合するUAS配列の下流に蛍光タンパク質またはルシフェラーゼの発現配列を配したベクターを構築した。NFkB結合配列の下流に蛍光タンパク質の発現配列を配したベクターを作製した。後者のベクターをトランスフェクションした細胞に、LPSまたはTNFを添加すると蛍光タンパク質の発現が認められた。細胞固定法の確立：ガラス基板上にNH2とDBCO-polyethylene glycol (PEG)-NHSを反応させ、NH2とNHSの結合によりDBCOをコーティングした。アジト糖を用いた代謝標識法により細胞膜にアジド基を表出させ、アジド基とDBCOの反応により集積回路上に細胞を固定できた。