植物病原糸状菌に対する「RNA農薬」の技術的基盤の構築

植物病原真菌“RNA农药”技术基地建立

• 批准号: 22K19181
• 负责人: 中屋敷 均
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19181/
• 关键词: いもち病菌; RNA; RNAi; マイコウイルス; 生物防除

本年度は、本実験計画にある「RNA農薬」の実現に必須であるマイコウイルスのクローニングおよびin vitro転写系の構築を行った。RNA農薬の土台となる因子の候補は、これまでにRNAのみで感染が起こると報告されているDiaporthe ambigua RNA virus1（DaRV1）と類縁のPyricularia oryzae umbra-like virus 1（PoUV1）と命名したウイルスである。PoUV1の5'RACEおよび3'RACEを行い末端配列を決定した後に全長cDNAをクローニングした。またこのcDNAにPCRを用いてT3およびT7プロモーター配列を付加してin vitroで二本鎖のウイルスRNAを合成できることを確認した。現在、このdsRNAをリポソーム、PEG等を用いて、菌糸や胞子に導入することを試みている。また、より簡易な方法としてPoOLV1のサテライトRNAを用いた「RNA農薬」の開発も試みており、二種のサテライトRNA（ARNA１およびARNA3）の全長cDNAのクローニングを試みている。ARNA1については、クローニングが済んでおり、PoUV1と同様にT7やT3プロモーターを付加してRNAの合成に成功した。ARNA3は過去にRNA-seqからインシリコで構築した配列に間違いがあることが判明し、現在これを再構築してクローニングを試みている。ARNA1に関しては配列内にモデル遺伝子であるGFPなどを組込み、実際に遺伝子サイレンシングを誘導できるか、そのためのコンストラクトを現在作成しているところである。

In the current year and this year, it is necessary for the current year and this year to prepare for the RNA farming program. It is necessary to pay close attention to the current situation. This year, it is necessary to improve the quality of the in vitro system. The RNA agricultural platform is affected by a number of factors, such as the waiting time, the number of RNA, the infection rate, the report report, the Diaporthe ambigua RNA virus1 (DaRV1) category, the Pyricularia oryzae umbra-like virus1 (PoUV1) category, the name of the Pyricularia oryzae umbra-like virus1 (PoUV1), the name of the product. The full-length cDNA at the end of the PoUV1 5 'Race queue 3' RACEE row determines the overall length of the array. "cDNA" PCR uses "T3", "T7", "configuration", "in vitro", "ordinary university", "RNA", "synthesis", "confirmation". At present, the use of bacteria, such as dsRNA, PEG, and so on, has been introduced into the bacteria. The full-length cDNA of the two kinds of ARNA1 ARNA3 (ARNA1 license ARNA3) in the use of "RNA agriculture" and the full-length cDNA of the two kinds of agricultural products, such as the use of agricultural products, and the full-length cDNA products. ARNA1