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Dicer蛋白質の機能ドメイン分析とその機能分化の進化的解析

Dicer蛋白的功能域分析及其功能分化的进化分析

基本信息

批准号：
17026025
负责人：
中屋敷均
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17026025/
关键词：
RNAサイレンシング RNAi Dicer 糸状菌

项目摘要

RNAサイレンシングは、ほとんどの真核生物に広く保存されている配列特異的な遺伝子発現抑制機構である。Dicer蛋白質はそのRNAサイレンシング経路の鍵酵素であり、塩基配列特異的な情報を伝達するための20-26bp程度のsiRNAと呼ばれる小さなRNAの生成を担う機能を持っている。本研究では、糸状菌であるイネいもち病菌ゲノムに存在する二つのDicer様蛋白質MDL1とMDL2の機能分化の解析とその進化的な保存性について調査することを目的としている。これまでにいもち病菌ではMDL2がRNAサイレンシング経路に関与することが示されたが、MDL1およびMDL2の菌糸におけるmRNA蓄積量をリアルタイムPCRを用いて調査した所、MDL2 mRNAは、MDL1 mRNAの約15倍蓄積していることが示された。また、RNAサイレンシング能を失っているMDL2破壊株でMDL1 cDNAを強発現させると効率は低いものの部分的にRNAサイレンシングを相補することが明らかとなり、いもち病菌におけるMDL1とMDL2の機能分化には、蛋白質自体の分化と共に転写コントロールが重要な働きを持っていることが示された。また、多くの種でゲノムが解読されつっある糸状菌において、Dicer遺伝子の分子系統解析を行った所、MDL1とMDL2は、子のう菌や担子菌といった糸状菌門が分かれる以前に分化していることが示唆された。このことから、これらパラログは、進化的に古くから存在し、基本的には異なった機能を持つものの、なお互いに相補できる余地は残しているものと考えられた。

RNA gene expression in eukaryotes is regulated by sequence-specific gene expression inhibition mechanisms. Dicer protein is responsible for the production of RNA at the 20-26bp level by key enzymes in the RNA pathway. The purpose of this study is to investigate the functional differentiation and evolution of two Dicer proteins, MDL1 and MDL2, in the presence of different pathogens. The mRNA accumulation of MDL2 mRNA and MDL1 mRNA in MDL1 and MDL2 was investigated by PCR and approximately 15-fold accumulation of MDL2 mRNA and MDL1 mRNA was observed. MDL1 cDNA is strongly expressed in MDL2 isolates, and its efficiency is complementary to that of some low level RNA isolates. MDL1 cDNA is functionally differentiated from MDL2, and its protein self is functionally differentiated from MDL2. The molecular phylogenetic analysis of Dicer gene was carried out by MDL 1 and MDL2, and the molecular phylogenetic analysis of Basidiomycetes and Basidiomycetes was carried out by MDL1 and MDL2. This is the first time that we've seen this. We've seen this before.