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Creation of Active Substances from Deep-sea Actinomycetes to Disrupt Drug-Resistant Acinetobacter spp.

从深海放线菌中产生活性物质来破坏耐药不动杆菌属。

基本信息

批准号：
22K19442
负责人：
坪内泰志
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Osaka Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

令和4年度では研究課題対象であり薬剤耐性化が危惧されている「ESKAPE」の一種であるAcinetobacter baumanniiに抗菌活性を呈する深海・海洋性放線菌のうち2株のMicromonococcus sp.に対して、活性物質の精製法確立および、生産菌ゲノム解析を行なった。本研究ないで実施された耐熱性試験、有機溶媒安定性試験、限外濾過分子サイズ推定などにより、当該活性物質がペプチド性分子であることが推察されたため、活性物質の精製においては硫酸アンモニウム沈澱濃縮、親水性クロマトグラフィーの一種であるHILIC系Preparative HPLCシステムを用い、精製を進めた。活性評価にはA. baumannii ATCC19606、弊学附属病院で分離された多剤耐性A. baumannii OCUAc-19, 0CUAc-20、そして当教室で作製したA. baumannii膜構造変異株を用い、精製各段階での活性の追跡、および比活性算出に用いた。活性分子はまだ単一分子の精製までに至っていないのが現状ではあるが、LC-MS-QTOF分析からは主たるピークとして確認できている。生産菌ゲノム解析では、long read dataにはONT社MinIONシステム、short read dataにはIllumina社NovaSeq、ないしはMGI社　のDNBSEQ T7を遂行し、2プラットフォームを採用した。得られた各データからopen source codeによるバイオインフォマティクス手法でwhole genome配列を構築することに成功し、コードされている16S rRNA遺伝子を指標とした分析からはいずれも新種株に相当することが見出された。

In 2010 and 2014, the research topic was to establish the antimicrobial activity of Acinetobacter baumannii, a species of ESKAPE, and to analyze the activity of Micromonococcus sp., two strains of deep-sea and marine actinomycetes. In this study, heat resistance test, organic solvent stability test, limited filtration molecular estimation, when the active substance is selected from the group of molecules, prediction, purification of the active substance, sulfuric acid precipitation concentration, hydrophilicity, HILIC system Preparatory HPLC system, use, purification. Activity evaluation A. baumannii ATCC19606, the Affiliated Hospital of the University of Science and Technology. baumannii OCUAc-19, 0CUAc-20, WHEN CLASSROOM A. Baumannii membrane structure different plants used, refined stages of the activity of the trace, the ratio of the activity calculated Active molecules are purified to the status quo, and LC-MS-QTOF analysis is performed to confirm the presence of active molecules. Production bacteria analysis, long read data, Illumina NovaSeq, MGI DNBSEQT7, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 1 All open source codes were successfully constructed.