ストレスと睡眠指標との関連　腸内神経叢の関与

ストレス感受性には心理的要因だけでなく生物学的要因も関与する。腸内細菌叢はストレス感受性の一つの規定因子とされている。本研究では生物学的ストレス指標として、酸化ストレス指標かつ睡眠物質であるグルタチオン（GSH/GSSG）に注目し、酸化ストレス指標が睡眠の質にどのように影響するのか、さらに腸内細菌叢がストレス感受性と関連する環境因となるか検討することを目的とする。過眠症の鑑別診断目的で1泊２日の検査入院[睡眠ポリグラフ検査(PSG)-反復睡眠潜時検査(MSLT)]をする症例に過眠症病態研究への協力を依頼し、入院期間中に血液と糞便の収集を行う。2022.4-2023.3の期間に118例の患者が研究に同意し、血液92検体、糞便28検体を収集できた。糞便はリボソームRNA領域の増幅を行いT-RFLP(Terminal-Restriction Fragment Length Polymorphism)法で腸内細菌の系統分類解析および糞便中の短鎖脂肪酸定量を行った(テクノスルガラボに委託)。委託が年度末となったため結果は2023.4には未着となった。解析は2023年度に行う。血中の酸化ストレス指標(GSH、GSSG)は高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって検出・定量を行う。以前、脳脊髄液中のGSH/GSSGはホウ素ドープダイアモンド電極を用いたHPLC系で安定して測定可能であったが、血漿には夾雑物が多く適応できず、赤血球分画を対象とするとGSH濃度が非常に低値でアッセイ間の変動が大きい課題が判明した。試行錯誤を行い、最終的にGSHは、赤血球分画を解凍・除タンパク処理直後にHPLCにかけることで、信頼できる実験系を確立ができた。しかし１検体ずつ処理する必要が生じ、所要時間が延長してたため、まだ収集された検体の半数以下しか解析できていない。順次処理を進め、解析を行う予定である。

ストレス感受性には心理的要因だけでなく生物学的要因も関与する。腸内細菌叢はストレス感受性の一つの規定因子とされている。本研究では生物学的ストレス指標として、酸化ストレス指標かつ睡眠物質であるグルタチオン（GSH/GSSG）に注目し、酸化ストレス指標が睡眠の質にどのように影響するのか、さらに腸内細菌叢がストレス感受性と関連する環境因となるか検討することを目的とする。過眠症の鑑別診断目的で1泊２日の検査入院[睡眠ポリグラフ検査(PSG)-反復睡眠潜時検査(MSLT)]をする症例に過眠症病態研究への協力を依頼し、入院期間中に血液と糞便の収集を行う。2022.4-2023.3の期間に118例の患者が研究に同意し、血液92検体、糞便28検体を収集できた。糞便はリボソームRNA領域の増幅を行いT-RFLP(Terminal-Restriction Fragment Length Polymorphism)法で腸内細菌の系統分類解析および糞便中の短鎖脂肪酸定量を行った(テクノスルガラボに委託)。委託が年度末となったため結果は2023.4には未着となった。解析は2023年度に行う。血中の酸化ストレス指標(GSH、GSSG)は高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって検出・定量を行う。以前、脳脊髄液中のGSH/GSSGはホウ素ドープダイアモンド電極を用いたHPLC系で安定して測定可能であったが、血漿には夾雑物が多く適応できず、赤血球分画を対象とするとGSH濃度が非常に低値でアッセイ間の変動が大きい課題が判明した。試行錯誤を行い、最終的にGSHは、赤血球分画を解凍・除タンパク処理直後にHPLCにかけることで、信頼できる実験系を確立ができた。しかし１検体ずつ処理する必要が生じ、所要時間が延長してたため、まだ収集された検体の半数以下しか解析できていない。順次処理を進め、解析を行う予定である。